王国艳，乔国峰，范建强，党文庆，何 敏，张国权

（1.山西农业大学动物医学学院，山西 太原 030032；2.娄烦县万顺源农牧发展有限公司，山西 太原 030300）

抗生素因能够防止细菌性疾病发生、提高动物生长性能等优点，近年来广泛应用于畜牧业[1-3]。但抗生素易在动物体内残留，引起细菌等产生耐药性，因此，寻找绿色的抗生素替代品成为热点研究方向[2-4]。

枯草芽孢杆菌是一种好氧、嗜温，并且能够形成芽孢的细杆状细菌，对营养需求较低，生长速度较快[5-7]，能够在消化道中较为稳定地生长[8]，具有调节肠道菌群、抑制肠道中有害菌群生长的作用，可促进动物机体的免疫器官发育[9-10]。本试验采集牛场饲料、干草、空气、水源、粪便等样品，分离得到菌株并对其进行鉴定。

1 材料与方法

1.1 样品来源

山西省某肉牛养殖场的精补料、青贮饲料、水源、干草、粪便、空气样品。

1.2 培养基及试剂

LB肉汤液体培养基、普通营养琼脂培养基、生化试剂管均（青岛生物有限公司）；琼脂糖（上海生物工程有限公司）。

PCR 引物、各型号tips（派诺森基因科技有限公司）；dNTP、TaKaRa LA TaqTM 聚合酶（TaKaRa有限公司）。

1.3 细菌的分离培养

在超净工作台上将饲料、水、干草分别放入LB肉汤试管，恒温增菌培养16 h，将增菌液划线接种于琼脂平板，37 ℃培养16 h；将粪便划线接种于琼脂平板，37 ℃恒温过夜培养；将牛舍中开盖静置3 min 的琼脂平板盖好盖子，37 ℃恒温培养过夜。观察各平板的细菌生长状态。

1.4 涂片镜检

挑取琼脂平板上有褶皱的单菌落，进行革兰氏染色、镜检。

1.5 生理生化试验

选取葡萄糖、乳糖、甘露醇、硫化氢等微量生化鉴定管，采用接种针穿刺待检菌株接种于微量生化鉴定管中，37 ℃过夜培养，观察并记录。……