邓 侃，陈廷涛，彭颖征

靶向重组Aif-T18融合蛋白对TEM1阳性肿瘤细胞的杀伤作用的研究

邓 侃1，陈廷涛2，*彭颖征3

（1.吉安职业技术学院，江西，吉安 343000；2.南昌大学转化医学研究院，江西，南昌 330031；3.厦门大学附属第一医院病理科，福建，厦门 361003）

验证Aif-T18融合蛋白对肿瘤内皮细胞标志分子1（TEM1）阳性肿瘤细胞的杀伤作用。采用基因工程技术方法构建重组质粒pIRES-TEM1-EGFP，转染TEM1阴性表达细胞MS1，经G418筛选得到TEM1阳性细胞株（MS1-TEM1）；通过构建重组质粒pET302-Aif和pET302-Aif-T18，转化至表达宿主菌中，经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导菌体得到所需的目的蛋白，采用流式细胞仪和MTT技术检测融合蛋白对MS1和MS1-TEM1细胞的亲和力和特异性杀伤的效果。本研究中，主要利用单链抗体scFvT18选择性携带凋亡诱导因子AIF，靶向抑杀TEM1阳性细胞，从而为Aif-T18融合蛋白在肿瘤治疗中的开发应用提供实验依据。

TEM1；单链抗体；Aif

近年来，恶性肿瘤的发病率逐渐增高，严重威胁着人们的生命安全和健康[1]。由于肿瘤细胞的异质性和遗传不稳定性等特点[2]，对于肿瘤的治疗难以达到预期的效果[3-4]。此外，肿瘤微环境包括肿瘤新生血管、血管周细胞、基质和间质细胞等为肿瘤细胞提供了生存和生长所需的营养及浸润途径，它能使肿瘤细胞逃避机体免疫系统的识别和抗原提呈，从而增加了机体杀伤肿瘤的难度。然而，与肿瘤细胞相比，这些构成肿瘤微环境的细胞具有遗传性质稳定和较低的突变率，又不同于其他正常组织细胞，它们是理想的肿瘤靶向目标。

最新的研究表明，TEM1可以在几乎所有实体瘤相关细胞中大量表达[5-6]，但在正常细胞中不表达或者表达水平极低[7-8]，它是一种理想的肿瘤靶向基因[9-10]。……