何燕超，张静，冯净净，揭志军

1. 复旦大学附属上海市第五人民医院呼吸内科，上海 200240； 2. 复旦大学社区健康研究中心(筹)，上海 200240

甲型H1N1流感病毒(简称H1N1)是最常见的呼吸道病毒，呈季节性流行，部分H1N1感染可进展为重症，出现病毒性肺炎，进展速度快，早期即可出现呼吸衰竭，病死率高。目前研究发现，H1N1重症感染可能与过度的炎症反应相关，但具体作用机制仍不明确[1]。

缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor，HIF)-1α是一种异源二聚体，由α和β 2个亚基组成。HIF-1α主要存在于细胞质内，而HIF-1β存在于细胞核内。生理状态下HIF-1α会被脯氨酸羟化酶(prolyl hydroxylases，PHDs)识别并迅速泛素化进而降解。缺氧状态下PHDs活性受抑制，导致HIF-1α水平升高，HIF-1α可转移到核内与HIF-1β结合形成活性HIF-1，继而作用于DNA激活一系列反应[2]。目前，HIF-1α已被证明可以参与血管生成、内皮细胞分化及纤维化，其与肿瘤的发病及自身免疫性疾病的活动密切相关。而HIF-1α在呼吸道病毒感染中的相关研究较少，尚不明确其作用[3-4]。近年来，一些动物研究发现，机体感染H1N1后，即使在不缺氧的炎症状态下亦可诱导肺HIF-1α水平升高，因此推测HIF-1α可能参与了H1N1感染的炎症反应[5-6]。鉴于此，本研究检测肺巨噬细胞感染H1N1后HIF-1α、干扰素(interferon，IFN)-γ、白细胞介素(interleukin，IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)-α和M蛋白(M protein，MBP)的变化，并将HIF-1α活性抑制后，检测IL-6、TNF-α相关通路核转录因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)、促分裂原活化的蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase，MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt)等蛋白的表达变化，探讨HIF-1α在H1N1感染诱导的炎症反应中的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞和病毒小鼠巨噬细胞系(RAW264.7)、犬肾细胞系(MDCK)、流感病毒A/PR/8(H1N1)病毒株来源于美国模式培养物集存库(American Type Culture Collection，ATCC)。……