杨 敬，吕燕霞，翁秀芳，梁智辉，吴雄文

华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系，武汉430030

CD1d分子属于CD1家族，在结构上与经典的MHC-Ⅰ类分子高度相似，与β2m非共价结合[1]，表达于细胞膜表面。自然杀伤T细胞(natural killer T cells，NKT)同时具有T细胞与NK细胞的表型，属固有免疫样T淋巴细胞，主要识别CD1d分子提呈的脂类、糖脂类抗原[2-3]。其中恒定自然杀伤T细胞(invariant natural killer T cells，iNKT)表达相对恒定的T细胞抗原受体(T cell receptor，TCR)，可被α-半乳糖基神经酰胺(α-Galactosylceramide，α-GalCer)特异性活化，活化后可分泌IFN-γ、IL-4、IL-17、IL-10等多种细胞因子，具有双向免疫调节功能[4-5]。iNKT细胞效应物功能多样，在自身免疫性疾病、移植耐受、抗肿瘤和抗感染性等病理过程中发挥重要作用[6-7]，因此，对其功能的研究具有重要意义。

α-GalCer/CD1d四聚体作为iNKT细胞识别的配体，已被广泛应用于iNKT细胞的检测与分选，但却存在加载的脂类抗原单一，不易获得等问题。通过加载不同的脂类抗原，制备真核表达的CD1d二聚体，可为iNKT细胞的功能研究提供稳定的工具来源。本室前期工作中已建立能够同时表达人CD1d(α1-α3)与IgG1-Fc(CH1-CH3区)融合蛋白及β2m的杆状病毒双表达载体pFastBacTMDual+[β2m+CD1d/IgG1-Fc]，并将携带目的基因的质粒通过转座作用转入到杆状病毒载体中。在此基础上，本研究通过提取昆虫杆状病毒质粒并转染至sf9细胞中，用ELISA法鉴定融合蛋白的正确性并建立hCD1d二聚体的纯化方法，获得的纯化hCD1d二聚体与抗CD28抗体可加载到细胞样大小(4～5 μm)的聚苯乙烯乳胶微粒上，制备人工抗原提呈细胞[8]，为T细胞提供TCR信号和共刺激信号，研究其对iNKT细胞的刺激效应，可为iNKT细胞的功能研究奠定基础。……