傅星源 兆丰华生物科技（福州）有限公司 福州 350014

伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起多种家畜和野生动物以发热、奇痒（猪除外）和脑脊髓炎为主要症状的急性传染病。该病毒属于疱疹病毒科疱疹病毒亚科，又称猪疱疹病毒Ⅰ型，对猪的危害最为严重[1]。 该病易与其他疫病混合感染，曾经在世界上广泛分布，给养猪业造成的损失仅次于猪瘟和口蹄疫[2-3]。1990 年之后，由于伪狂犬病病毒基因缺失疫苗的使用，该病得到了控制，发病率大大降低，某些地区伪狂犬病病毒净化取得一定成效[4-6]。 但自2011 年以来，猪伪狂犬病又有反弹趋势，我国多个省、市、地区的猪场均发生了该病， 造成了一定经济损失[6-7]。 研究表明，2012 年后流行的伪狂犬病毒株gB、gC、gD、gE 等重要糖蛋白的氨基酸序列发生了突变[8-10]。本试验通过对福建某猪场疑似伪狂犬病死猪采集组织病料，进行伪狂犬病病毒分离鉴定， 成功分离出伪狂犬病病毒并进行测序。 与Genbank 中的参考毒株进行比较， 对福建地区伪狂犬病病毒株的分子流行病学及毒株溯源进行了初步探讨。

1 材料和方法

1.1 病料样品及主要试验材料 病料样品采集自福建邵武某猪场临床症状疑似伪狂犬病发病仔猪；2×GC Buffer、Taq DNA 聚 合 酶 为TAKARA 公 司产品；dNTP 为上海生工产品； 琼脂糖为Sigma 公司产品。

1.2 引物设计与合成 检测引物参照文献[11]的引物序列进行合成，预期扩增片段长度为347 bp；参照Genbank 中登录的伪狂犬病病毒基因组序列 （登录号NC006151）设计一对特异性引物，用于gG 基因扩增，预期扩增片段长度为1 501 bp，引物由上海生工生物工程有限公司合成。……