刘 静，杨富民 *，王丽君，苏阿伦

（1.甘肃农业大学 食品科学与工程学院，甘肃 兰州 730070；2.甘肃省食品检验研究院，甘肃 兰州 730030）

伯克霍尔德菌是一种广泛存在于水、土壤、植物和人体中的革兰氏阴性细菌。1949年美国植物病理学家BURKHOLDER WH等[10]首次发现它可以引起洋葱茎腐烂，称为洋葱假单胞菌（Pseudomonas cepacia），1992年YABUUCHI E等[11]正式将该菌及其他6个属于rRNA群的假单胞菌归为一个新属，即伯克霍尔德菌属（Burkholderia）。伯克霍尔德菌能产生多种具有抑菌活性的代谢产物如铁载体（Pyochenlin，Pyoverdine）、吩嗪、硝吡咯菌素、苯基吡咯、单萜生物碱、Cepaciamide A、Cepacidine A、Cepacin A等[12-14]。对于伯克霍尔德菌抑菌物质的分离基本遵循三步走原则，目前相关的报道并不多，权春善等[15]通过Sephadex-75pg及Sephacryl S-100两步柱层析，然后用HPLC分离，成功实现了洋葱伯克霍尔德菌CF-66抑菌物质的纯化；任嘉红等[16]利用硫酸铵分级盐析、Sephadex G-50葡聚糖凝胶层析和DEAE-Sephadex A-25高流速离子型葡聚糖凝胶层析对吡咯伯克霍尔德菌JK-SH007产生的抑菌物质进行了纯化；陈京元等[17]利用超滤、Sephadex G-25凝胶柱层析对洋葱伯克霍尔德菌C23抗真菌活性多肽进行了分离，并确定了其分子质量，成为首个报道的伯克霍尔德菌属产分子量超过5 000 Da的多肽。

本实验从甘肃省地方特色发酵产品-陇西腊肉中成功的分离出一株具有抑菌活性的菌株，经16S rDNA全序列测序，鉴定为伯克霍尔德菌（Burkholderia），在前期研究的基础上，利用不同浓度的硫酸铵进行分级沉淀，高速离心获得的沉淀经两次固相萃取（solid phase extraction，SPE）小柱层析，粗分离液分别用制备型和分析型高效液相色谱进一步纯化，以期获得纯物质，为后续抑菌物质结构的分析及抑菌机理的深入研究奠定了基础。……