李 玲，刘 毅，赵金玉

（1.获嘉县农业农村局，河南 获嘉 453800；2.河南港陆惠农股份有限公司）

1 样品来源

猪血清（被检血样100 份）由豫东、豫西、豫南、豫北等几个规模化猪场提供：母猪猪血清25份、哺乳仔猪22 份、保育猪28 份、育肥猪23 份。以上血清均无菌采集于猪耳缘静脉或者前腔静脉；将采集血液置于离心机内，3 000 r/min离心5 min后取出，上层血清作为备用。

2 试剂与实验设备

猪伪狂犬ELISA 试剂盒，PRV 抗原包被板，标准阳性、阴性血清，HRPO标记的抗PRVgE/gB抗体，TMB底物溶液，终止液，洗涤液，样品稀释液等。酶标检测仪、YXJ-2 台式高速离心机、微量移液器、枪头、超净台等由实验室提供。

3 实验方法

3.1 实验步骤

此次伪狂犬病抗体检测采用间接ELISA 法：①加稀释液，按说明书要求用移液器将血清稀释液依次加入每个检测孔和对照孔中；②加阴阳性对照血清；③将待检血清用移液器分别吸取100 μl 加入ELISA 板孔中，使用时记得更换吸头，用振荡器震荡反应板中的溶液；④温育，将反应板置于37 ℃温箱内30 min；⑤洗板，把各孔内的液体甩干，吸取200 μl 洗涤液将板孔洗涤3～5 次；⑥加酶标二抗，在反应孔内加入50 μl酶标抗体（即取即用），然后将反应板置于温箱中37 ℃孵30 min；⑦洗板，将各板孔内的液体甩干，吸取200 μl洗涤液将板孔洗涤3～5 次；⑧加底物；⑨终止，在每份反应孔中加50 μl HF 液结束反应；⑩读数，在630 nm 处测定检测孔以及对照孔的吸光度值。

3.2 判断标准

在酶标仪上测OD630 nm 值。试验合理的要求是阴性参照孔平均OD630 nm 值与阳性参照孔平均OD630 nm值之差≥0.4。S=样孔OD630 nm 值，N=阴性参照孔平均OD630 nm 值。若S/N 比率≤0.6，该血样判为PRV阳性。

若0.6＜S/N≤0.7，该血样判为疑似。……