徐燕梅， 卓 瑾， 许雄程， 何梦娇， 林敏魁， 骆 凯， 朱丽芳

目前颌面部骨缺损常采用骨移植进行修复，但存在成骨效率低及免疫反应等不足。组织工程技术为颌面部骨组织缺损修复提供了一个新的治疗方式。其中，细胞膜片技术无需酶消化，可保留完整的细胞间连接及胞外基质结构，有望弥补传统组织工程技术的缺点[1]。近年来，细胞膜片技术已被应用于各种组织再生研究中。Ohki等[2]于2009年首次将体外构建的人口腔黏膜上皮细胞膜片移植于食道癌患者体内，成功修补了缺损组织，这一开创性临床试验表明细胞膜片技术在临床诊疗中拥有巨大的潜能。Chen等[3]在将人牙周韧带干细胞膜片移植于牙周缺损中，证实该牙周韧带干细胞膜片在体内具有良好的生物安全性。骨膜细胞位于骨组织表面的纤维组织内其来源丰富，能够自我更新，并能够多向分化，在骨组织再生修复中发挥重要的作用[4]。已有研究将骨膜移植于人上颌骨，成功实现了骨组织再生，提示骨膜细胞可成为骨缺损修复的种子细胞[5]。本研究拟采用维生素C连续诱导法构建兔胫骨骨膜细胞膜片，并对其基本生物学特性进行研究，为利用骨膜细胞膜片修复颌面部骨缺损提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 4月龄雄性新西兰大白兔，体质量2.2～2.4 kg[上海市松江区松联实验动物场(许可证号：SCXK(沪)2017-0008)]。

1.1.2 材料 改良Eagle培养基(美国Hyclone公司)；胎牛血清(澳大利亚Wisent公司)；Ⅱ型胶原酶、维生素 C、茜素红(美国Sigma公司)；CCK-8试剂盒(日本同仁化学研究所)；……