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人早幼粒细胞cDNA 文库中与GINS2 发生相互作用靶蛋白的筛选和鉴定

2021-01-31潘玉卿郑亚婷郭成斌王良晓

吉林大学学报(医学版) 2021年1期

张 曦, 潘玉卿, 余 鑫, 郑亚婷, 郭成斌, 徐 娜, 王良晓, 何 亮, 杨 丽

(1. 云南省肿瘤医院 昆明医科大学第三附属医院检验科,云南 昆明 650118;2. 昆明医科大学第一附属医院检验科 云南省实验诊断研究所 云南省检验医学重点实验室,云南 昆明 650032)

白血病是骨髓造血干细胞恶性克隆所形成的血液系统肿瘤。在全球范围内,每年白血病的发病率和病死率约占所有病例的2.4%和3.2%[1]。在中国,白血病新发病例约为每年75.3/10 万[2]。伴15 号染色体早幼粒细胞基因( promyelocytic leukemia,PML) 和17 号染色体维甲酸受体基因(retinoic acid receptor alpha,RARα) 易位的急性早 幼 粒 细 胞 白 血 病 (acute promyelocytic leukemia,APL) 是急性髓细胞性白血病(acute myelocytic leukemia,AML)的一个特殊亚型,临床上常见发热、感染、贫血和细胞浸润等急性白血病症状。在APL 形成过程中,融合蛋白PMLRARα 并非一成不变地始终作为一个整体来发挥致癌作用,其致白血病的分子机制仍不清楚。前期研究[3]表 明:GINS2 基 因 能 与 缺 失 核 定 位 信 号(nuclear localization signal,NLS) 的 变 异 蛋 白PML (NLS-) 在全细胞内共定位表达,提示GINS2 在单个细胞水平干扰了野生型PML 的正常功能并参与了APL 的发生发展。GINS2 基因作为GINS(go-ichi-ni-san2)家族成员之一,与真核细胞的DNA 复制及损伤有密切关联,参与细胞周期的调控,并对细胞的增殖和凋亡起到关键作用[4]。目前国内外尚无关于GINS2 编码蛋白与人早幼粒细胞cDNA 文库互作蛋白筛选和鉴定的报道,为此本文作者使用前期构建成功的人早幼粒细胞cDNA文库[5]和诱饵质粒pGBKT7-GINS2[6],筛选出文库内与GINS2 发生相互作用的靶蛋白,为进一步阐释APL 发生的分子机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器酵母双杂交系统购自美国Clontech 公司,诱饵质粒pGBKT7-GINS2 和人早幼粒细胞cDNA 文库由本实验室前期成功构建,大肠杆菌Top10 由本室冻存。……

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