张延超，刘 帅，张玉婷，吴 燕

（天津市药品检验研究院，天津 300070）

药品包装材料与结构形式，尤其是直接接触药品的包装材料，对保证药品稳定性起重要作用。由于药包材与药品的接触时间可长达整个药品的有效期，因此对药包材生物安全性的重视应等同于对药品本身安全性的重视［1，2］。复合包装材料由于具有良好阻氧性、阻水性与高阻渗性，更好地满足药品包装的特定需求，因而广泛用于药用包装［3，4］。由于这种材料的工艺特点，需要在几层之间添加胶粘剂，形成稳定的复合材料。胶粘剂的主要成分为芳香族聚氨酯胶粘剂，通常会残留一些游离的芳香族异氰酸酯。当这种游离的芳香族异氰酸酯接触空气中的水时，就会水解而生成2，4-二氨基甲苯［5，6］。2，4- 二氨基甲苯具有较强的致癌性，与内容物接触之后，容易迁移到内容物中［7］。人体服用后可能会出现恶心、呕吐、头痛、失眠、溶血性贫血等症状，严重者可致癌，对人体健康造成危害［5］。

现有国家卫生标准主要通过使用气相色谱法和气相色谱-质谱法两种方法测定2，4-二氨基甲苯含量。但这类方法需要衍生化前处理，操作繁琐、检验周期长、检验成本高，同时有毒有害试剂的使用对实验人员和环境都会造成伤害［7,8］。因此，有必要开发出更加快速、简便、环保的方法检测复合包装材料中2，4-二氨基甲苯的含量。

本文建立了高效液相色谱-串联质谱法测定复合包装材料中的2，4-二氨基甲苯，既能降低基质的干扰，又能提供高选择性、高灵敏度和高精确度的分析。同时此方法无需衍生化前处理，从而简化试验前处理过程，缩短检验周期，降低检验成本，避免有毒有害试剂对检验人员和环境的伤害。

1 仪器、试剂与材料

仪器：岛津LC/MS-8050 液相色谱质谱联用仪，Solution 色谱工作站；HHS 型电热恒温水浴锅HBYQ；Mill Advantage A10 纯水仪。试剂：乙腈（MERK，色谱纯）、甲酸（SIGMA，色谱纯）、超纯水。对照品：2，4-二氨基甲苯（Dr Ehrenstorfer，纯度：99.8%，批号G150549）。材料：移液器、量瓶、2 ml 样品瓶、滤膜（0.22 μm）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18（50 mm×2.1 mm，1.8 μm），PN 959757-902；流动相：0.1%甲酸水溶液（60%）-乙腈（40%）；进样量：2 μl ；柱温：35 ℃；流速：0.25 ml/min。离子源：ESI+，正离子扫描；离子源接口电压：4.5 kV；雾化气：氮气3.0 L/min；干燥气：空气10 L/min；碰撞气：氩气；脱溶剂管温度：250 ℃；加热模块温度：400 ℃；扫描模式：多反应监测（MRM）；MRM 参数见表1。

表1 2,4-二氨基甲苯MRM 参数

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取2，4-二氨基甲苯对照品约10 mg，精密称定，置10 ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为2，4-二氨基甲苯储备液，浓度约为1 mg/ml。用水逐级稀释配制浓度为1.0、2.0、5.0、20、50和100 ng/ml 的系列对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 将样品剪碎，取2 g，精密称定，至250 ml 磨口硼硅玻璃烧瓶中，精密加入100 ml 水，煮沸回流1 h，冷却后加水补足重量，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 系统适用性试验 取对照品和供试品溶液按色谱条件测定。色谱图见图1。

图1 对照品（A）供试品（B）色谱图

2.4 标准曲线的建立 取“2.2.1”项下系列对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，以浓度为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），得标准曲线的线性方程为Y=11 466.523 7X-3 486.934 1（r=0.999 9），结果表明，2，4-二氨基甲苯在1.0～100.0 ng/ml 范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 取2，4-二氨基甲苯对照品浓度为5 和20 ng/ml 的溶液，分别重复测定6 次。结果峰面积的RSD 分别为0.86%和0.59%（n=6）。表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取2，4-二氨基甲苯对照品浓度为5 和20 ng/ml 的溶液，分别在室温放置0、12 和24 h，进行测定。结果峰面积RSD 分别为0.63%和0.85%（n=3）。表明对照品溶液室温放置24 h 稳定。

2.7 检出限 取2，4-二氨基甲苯储备液用水逐级稀释，经测定，信噪比（S/N）为2 ～3 时，溶液浓度为0.2 ng/ml，确定2，4-二氨基甲苯检出限（LOD）为10 ng/g。

2.8 定量限 取2，4-二氨基甲苯储备液用水逐级稀释，经测定，信噪比（S/N）为10 时，溶液浓度为0.5 ng/ml，确定2，4-二氨基甲苯定量限（LOQ）为25 ng/g。

2.9 回收率试验 将样品剪碎，取2 g，精密称定，置250 ml 磨口硼硅玻璃烧瓶中，分别加入标准中间液（10 μg/ml）200 μl，精密加入100 ml 水，煮沸回流1 h，冷却后加水补足重量，经0.22 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，同一浓度平行制备6 份，计算回收率。结果2，4-二氨基甲苯平均回收率为84.11%，RSD 为1.68%（n=6）。见表2。

表2 2,4-二氨基甲苯回收率试验结果（n=6）

2.10 重复性试验 取回收率试验制备溶液，平行制备6 份，结果显示RSD 为0.59%（n=6）。

2.11 样品提取试验 将供试品溶液测得峰面积代入标准曲线，进行计算。结果4 批样品均未检出2,4-二氨基甲苯，见表3。

表3 复合包装材料2，4-二氨基甲苯提取试验结果

3 讨论

本研究建立了用高效液相色谱-串联质谱法对复合包装材料中2，4- 二氨基甲苯的含量的检测方法。试验的线性系数、精密度、稳定性、回收率、重复性等技术指标满足相关分析检测要求。本方法具有高灵敏度、高精确度的优点，同时此方法无需衍生化前处理，从而简化试验前处理过程。便于市场监管，保障人民健康。