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小鼠睾丸荧光定量PCR分析的内参基因筛选

2021-01-26熊显荣马鸿程闵星宇郝振宇

西南民族大学学报(自然科学版) 2020年5期
关键词:小鼠分析检测

海 卓,熊显荣,马鸿程,闵星宇,郝振宇,张 贺,李 键,2

(1.西南民族大学畜牧兽医学院,四川 成都 610041;2.西南民族大学青藏高原动物遗传育种资源保护与利用教育部重点实验室,四川成都 610041;3.西南民族大学动物科学国家民委重点实验室,四川成都 610041)

实时荧光定量PCR是一种能够通过实时荧光信号积累获得目的基因表达水平的分子检测技术.其具有操作简单、灵敏度高和特异性强等特点,成为基因表达分析的一种重要工具.然而在检测过程中提取的样本RNA纯度、反转录后获得cDNA质量以及实验操作过程中多种因素皆能影响实验的准确性[1].因此,在进行目的基因检测时常常引入单个或多个内参对目的基因进行数据校准.

内参基因又称管家基因.就理论而言,同一内参基因受环境影响较小,在任何条件下的表达模式都应相对稳定[2].但有研究发现,这些用于标准化矫正的内参基因在不同物种、组织和细胞中的表达模式并不相同,且存在较大差异[3-5].由此可见,对目的基因表达水平进行研究时,盲目选择内参基因可能致使实验结果失真.因此,在检测不同物种、组织及细胞中目的基因mRNA表达水平时,预筛选出单个或多个稳定表达的内参基因具有重要意义.

小鼠因其繁殖能力强、成本低等特点,已被广泛用于各种相关生物学研究.睾丸是雄性动物精子发生及分泌雄性激素的场所,其发育是一个复杂而精密的生理过程[6-7],随着对雄性小鼠生殖相关分子……

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