高永伟，李志中，王建国，丛晓楠，宋艳萍，张秀玲

(1.威海市环翠区动物疫病预防控制中心，山东 威海 264200；2.山东新希望六和集团有限公司，山东 青岛 266000；3.威海市环翠区畜牧业发展中心，山东 威海 264200)

0 引言

环翠区某规模蛋鸡场，其中一栋鸡舍自开产以后出现产蛋率上升缓慢，产蛋率低，160日龄产蛋率仅为73%，蛋品质量差，陆续出现白壳蛋、软壳蛋，鸡群体重不达标，平均低于标准5%～10%，同时伴有呼吸道异常症状；鸡只剖解见肝脏淤血，肝脏边缘有出血点，腺胃有出血，肌胃下有溃疡，脾脏变小，盲肠扁桃体有出血等情况。

由于临床诊断不足以对该鸡群进行确诊，特对发病鸡群进行2次采样，通过实验室病原学及血清学检测分析，确诊该鸡群为免疫抑制病与支原体混合感染，现将检测诊断报道如下。

1 材料与方法

1.1 样品采集

分别取160日龄及175日龄患病蛋鸡肛门拭子10份、咽喉拭子10份、病变部位组织5份、血清30份。

1.2 主要试剂

ALV-J抗体、REV抗体、CAV抗体、MG抗体、MS抗体、IB抗体ELISA检测试剂盒，购自北京爱德仕公司；病毒核酸提取试剂盒Easy Pure Viral DNA/RNA Kit购自北京全式金生物技术有限公司。H9/ND/RE-11/RE-12检测抗原购自哈尔滨维科生物技术开发公司。

ALV-J引物，MDV引物，CAV引物，REV引物，M引物，MS引物，MG引物，IB引物，FADV引物及REO检测引物为本实验室设计及保存。

1.3 仪器设备

PCR仪，德国Biometra公司;酶标仪，美国伯腾公司；凝胶成像仪，购自美国伯乐公司。

2 实验方法

2.1 PCR病原检测

2.1.1 样品处理

病料：将采集的10份的病料按1:4加入灭菌的PBS或生理盐水，置研磨器(灭菌)中充分研磨后，按每管1mL分装到1.5 mL灭菌的离心管中，反复冻融3次，10 000 r/m离心5 min，取上清液200 μL用于核酸提取。……