张 伟,马培芳,李延龙,王雅丽,王继芸,张华敏,陈建华, 尹守恒,李克寒

(河南省韭菜工程技术研究中心/平顶山市农业科学院，河南 平顶山 467001)

氨基酸是蛋白质的组成基本单位，是人体必需的营养。而韭菜叶片中富含游离氨基酸是用来描述韭菜叶片营养价值的一个重要品质指标。韭菜主食叶片，进行游离氨基酸总量的测定是对韭菜叶片氨基酸营养的确定。航研998与平韭2号都是比较新出的品种，所以以这两个品种作为实验材料。

游离氨基酸与水合茚三酮反应，产生二酮茚—二酮茚胺蓝紫色化合物。在一定范围内，颜色的深浅与游离氨基酸含量成正比，可以用紫外可见分光光度计，在570 nm下测得蓝紫色溶液的吸光度，然后根据标准曲线计算样品中游离氨基酸的含量。

1 材料和方法

1.1 实验材料、仪器和试剂。

1.1.1 材料 新鲜韭菜叶片

1.1.2 仪器 主要有:

(1)研钵、漏斗、三角瓶、滤纸 、容量瓶(50 mL, 100 mL);

(2)橡胶塞刻度试管50 mL;

(3)移液枪200 μL、1 000 μL、5 000 μL;

(4)沸水浴电磁炉;

(5)UV-1600紫外可见分光光度计;

(6)分析天平。

1.1.3 试剂 主要有:

(1)10%乙酸。

(2)水合茚三酮试剂：称取0.6 g茚三酮加入15 mL正丙醇，再加入30 mL正丁醇及60 mL乙二醇溶解，最后在加入9 mL pH5.4乙酸—乙酸钠缓冲液，混匀，贮于250 mL 广口棕色瓶于冰箱冷藏室内保存，10 d内有效。

(3)乙酸—乙酸钠缓冲液(pH5.4)：称取32.56 g乙酸钠(NaAc)，加入超纯水加热至沸，冷却后加30 mL冰乙酸，用超纯水定容至100 mL。

(4)氨基酸标准液：称取80℃烘干的L-亮氨酸(生物技术级)46.8 mg，以10%异丙醇溶解，并定容至100 mL，取此液5 mL用超纯水稀释至50 mL，即为每毫升含氨基氮5 ug的标准液。

(5)0.1%的抗坏血酸：50 mg溶于50 mL超纯水中，现用现配。……