周年，王安华，洪燕，郑洋滨，刘宁

1.江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，南昌 330029；2.南昌轨道交通集团有限公司，南昌 330038

破伤风抗毒素是经典的一种马抗血清制品，它能中和血液中破伤风梭菌产生的破伤风毒素，缓解破伤风症状和降低病死率。人类应用破伤风抗毒素防治破伤风历史已近百年，挽救了许多人的生命，但其临床应用存在一定的局限性［1］。传统工艺生产的破伤风抗毒素有效成分F（ab'）2纯度较低，残存的大分子马免疫球蛋白（IgG）及小分子杂蛋白引起的不良反应发生率高，制约了破伤风抗毒素的临床应用和进一步发展。因此本研究根据破伤风抗毒素成品中F（ab'）2、IgG 及小分子杂蛋白分子量的不同，拟应用凝胶排阻层析，以紫外检测蛋白质特征峰A280nm 绘制的散点图为评价指标，考察不同流速、洗脱剂、样品浓度对破伤风抗毒素蛋白分离的影响，经非还原型十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳后对不同组分染色结果进行扫描对比；按照《中国药典》2015 版异常毒性检查法对纯化后的组分进行安全性检查。

1 材料与方法

1.1 材料

破伤风抗毒素（0.75 mL，1 500 IU/支），购自江西生物制品研究所，批号：20 180106；葡聚糖凝胶G-100（Sephadex G-100）（批号：10244707，瑞典GE healthcare Bio-Science）；磷酸二氢钾（批号：20180703，国药集团化学试剂有限公司）；氢氧化钠（批号：20160518，广东光华科技股份有限公司）；蛋白分子量标准品（10-180 KDa）：（伊莱萨，批号：EL2661）；常规考马斯亮蓝染色液，批号：1210A19，Tris-HCl 缓冲液（0.5 mol/L，pH6.8），丙烯酰胺-亚甲基双丙烯酰胺溶液（30%，29∶1），批号：1210A19，均购自北京雷根生物技术有限公司；……