胡二坤，郭兴凤，郑慧

1. 河南职业技术学院烹饪食品与健康学院（郑州 450046）；2. 河南工业大学粮油食品学院（郑州 450001）

鱼蛋白粉经过蛋白酶水解，其产物具有一定的抗氧化活性。在食品工业中，为了更充分地利用鱼蛋白酶解产物，尤其利用其自由基清除能力作天然食品抗氧化剂，有必要对其复杂的水解产物进行分离和纯化，以提高水解产物的抗氧化效果。蛋白的酶解产物一般是多肽片断或游离氨基酸，目前常用的分离纯化方法有超滤、层析等。

凝胶过滤色谱法是以多孔凝胶为支持物，利用分子筛原理进行分离的方法，也是目前研究中常用的层析方法之一[1-2]。凝胶层析被广泛用于脱盐、蛋白质分离纯化和相对分子质量的测定等方面，在鱼蛋白酶解产物的分离方面也有应用。Venkatesan等[3]利用G-25葡聚糖凝胶分离纯化北方鳕鱼鱼肉蛋白；庄永亮等[4]利用G-25葡聚糖凝胶层析法分离纯化罗非鱼鱼皮抗氧化肽；江海萍[5]采用G-15葡聚糖凝胶层析法分离蓝园鰺抗氧化活性肽。

此次试验选用凝胶层析法对鱼蛋白酶解产物进行分离纯化，考察洗脱速度和上样浓度对鱼蛋白水解产物分离效果的影响，确定凝胶层析分离纯化鱼蛋白酶解产物的最佳条件，为后续分离纯化组分的抗氧化活性研究奠定基础。

1 材料与设备

1.1 材料与试剂

Sephadex G-15（Pharmacia公司）；碱性蛋白酶（Alcalase 2.4 L，诺维信（中国）生物技术有限公司）；还原型谷胱甘肽（纯度＞99%，阿尔法化工有限公司）；1, 1-二苯基-2-苦基肼自由基（DPPH·）、无水乙醇等试剂均为分析纯。……