元青苗 段玉宝*

(1.西南林业大学，云南省高校极小种群野生动物保育重点实验室，昆明，650224；2.西南林业大学生物多样性保护学院，昆明，650224)

随着分子生物学的发展，更多的鸟类(Aves)mtDNA基因全序列被测定[1]，线粒体基因组作为一种研究手段在揭示鸟类的起源、系统发生[2-3]、分歧时间的研究中发挥着重要作用[4-5]。在mtDNA的13个蛋白编码基因中，COI和Cytb基因常用于动物类群的分类和系统发生关系的研究中[6-7]，具有良好的解析作用。

1 材料与方法

1.1 材料数据来源

用于研究的样品采集于云南省西北部的泸水县高黎贡山，在此区域中获得1只黄腰响蜜个体；取0.5 g左右的肌肉组织，采用无水乙醇进行浸泡，保存于西南林业大学生物多样性保护学院。其余19个物种的COI和Cytb基因序列均来自于NCBI(National Center for Biotechnology Information)数据库。其中，将犀鸟目(Bucerotiformes)作为外群[11]，共下载2条序列。每条COI和Cytb序列的长度分别大于650 bp和861 bp。物种信息详见表1。

表1 本研究所需的物种基因序列信息Tab.1 List and gene information of species in this study

1.2 DNA的提取、扩增及测序

从采集的肌肉组织样品中提取总线粒体DNA，DNA提取完成后加入100 μL ddH2O进行溶解，保存于-20℃的冰箱中。

线粒体基因组的引物和反应体系参照Sorenson等[12]的研究。DNA提取和PCR初步扩增完成后，经过1%的琼脂糖凝胶电泳检测，在紫外灯下观察，然后将扩增成功的产物送往上海派森诺生物科技有限公司进行测序。黄腰响蜜的线粒体全基因组信息也已提交NCBI数据库，登录号为MH737741。

2 数据处理

2.1 序列处理

在MEGA 7软件[13]中导入目标物种的序列，20条序列进行多重比对，比对好后对序列进行剪切，每条COI基因序列的最终长度均为650 bp，Cytb序列为861 bp。……