陈 永，杨莲辞，常定发

（1.云南省泸西县动物疫病预防控制中心，云南 泸西 652400；2.云南省泸西县动物卫生监督所，云南 泸西）

随着动物疫病检测需求增加，PCR基因扩增实验室业务量有所加大。开展PCR检测，很可能会出现实验室污染，影响实验质量和效果，造成假阳性，同时也会给实验人员健康造成损害。

1 PCR实验室污染检测评估

（1）因PCR检测的样品及其产物污染无色无味，主观很难判断，应定期对实验室操作台、地板、设备、器具等采集棉拭子样进行检测，评估是否存在污染。样品要规范编号记录，以便追溯。（2）查看实验室最近疑似污染实验检测报告，看阴性对照（水）Ct值（反应管内营光信号达到设定的值时所经过的循环数）。阴性对照（水）Ct＞38，轻微污染；35＜Ct＜38，中等污染；Ct＜35，严重污染。如只是阴性对照污染，样品中仍有阴性，则可能是样品交叉污染或操作不当，通过规范仔细的重复操作以避免污染。如所有的曲线都呈阳性，而且阴性对照和许多标本的线性相似，则考虑是系统污染，如检测试剂污染或气溶胶污染。（3）试剂对照:在PCR试剂中不加模板DNA或RNA，进行PCR扩增，以监测试剂是否污染。

2 污染的来源

2.1 阳性样本或阳性样本核酸的污染 此类污染多发生于样品处理间，造成样品间的污染。在采集的样品中，如存在阳性样品，在样品的采集、放置、运输的过程中，由于封装不严溢出于容器外，导致污染容器、样品的交叉污染等；实验过程中，移液器使用不当，吸液时回枪手速过快导致的移液器枪头部分被阳性样本污染；……