益 莎

（东营市东营区畜牧业发展服务中心，山东 东营257091）

血凝抑制试验（Hemagglutination inhibition test，HI）是鸡新城疫抗体实验室检测中最常用的方法，可用于新城疫疫苗免疫后的效果评估及临床疑似病例的辅助诊断，因其操作简便、成本低，可进行大量样本的高通量快速检测，在基层实验室中广泛应用。但影响血凝抑制试验结果的因素众多，如红细胞新鲜程度、抗原种类、稀释液的种类、血清质量、环境温度和作用时间等，需要注意各种操作细节，操作时注意力应高度集中，避免漏加和重复加样，方能得到最准确的结果，否则可能得出错误结果，给养殖户造成一定的经济损失。笔者结合自己多年工作经验，对操作过程中需要注意的事项归纳总结如下。

1 稀释液配制

稀释液可采用0.85%的生理盐水，也可用磷酸盐缓冲液（PBS），通常PBS酸碱缓冲能力好，测出的结果更接近真实情况，更准确。但PBS配制相对复杂，且保存时间短、不稳定，容易出现絮状沉淀，检测中常用的是pH值7.2 、浓度0.01 mol·L-1的PBS，配制方法为氯化钾0.2 g、氯化钠8.2 g、磷酸二氢钠0.24 g、磷酸氢二钠1.44 g，加去离子水1000mL，搅拌溶解充分混匀，调节pH值至7.2，分装后121℃高压灭菌15min，室温保存备用。严格控制PBS的pH值，否则可能会导致自凝或吸附于红细胞上的病毒脱落，建议条件不好的基层试验室选用生理盐水做稀释液，配制简单、方便，即使不会配也可以购买医用商品化试剂，相对稳定可靠，对试验结果几乎无任何影响。

2 红细胞悬液制备

制备红细胞悬液是要选用SPF鸡或健康非免疫鸡，多选几只鸡，采集的血液混合，也可选用免疫过疫苗的淘汰鸡，但洗涤红细胞时一定要多洗几遍。……