陈佩琴，孙 翟，傅 悦，肖奇梦，柏明珠，张箴波

上海交通大学附属第一人民医院妇产科，上海 201620

卵胞浆内单精子显微注射技术（intracytoplasmic sperm microinjection， ICSI）是目前治疗严重的少、弱、畸精症甚至无精症的主要手段。导致ICSI 失败的已确定因素是卵母细胞激活不足（oocyte activation deficiency，OAD）。OAD 通常与精子无法产生足量磷脂酶C-ζ（phospholipase C-ζ，PLCζ）引起钙离子（Ca2+）浓度升高，即Ca2+振荡，从而激活卵母细胞有关［1］。为解决这一问题，人工卵母细胞激活（artificial oocyte activation，AOA）的相关研究越来越多，胚胎实验室逐步开展针对天然活化剂（如PLCζ）、人工活化剂（如A23187、离子霉素、氯化锶），甚至电脉冲激活卵母细胞的试验。本文主要总结AOA技术的原理、方式及安全性。

1 卵母细胞活化机制与Ca2+振荡

卵母细胞活化是一个Ca2+浓度升高的过程。卵母细胞在蛋白类细胞因子的作用下，停滞于第二次减数分裂中期。当胞质内Ca2+浓度升高时，这些对Ca2+敏感的因子失活，从而诱发皮质反应，使卵母细胞完成减数分裂并排出第二极体。

精子进入卵母细胞后释放储存于内质网中的Ca2+，同时扩散精子释放的卵母细胞激活因子（spermatozoonreleased oocyte-activating factors，SOAFs），后者将磷脂酰肌醇4，5-双磷酸酯（phosphatidylinositol 4，5-bisphosphate，PIP2） 水解为肌醇1，4，5-三磷酸酯（inositol 1，4，5-triphosphate，IP3）和二酰甘油（diacylglycerol，DAG）。分解产生的IP3与特定受体结合并引起Ca2+的释放，诱导Ca2+振荡。Ca2+浓度升高可增强PLCζ 活性，并通过正反馈机制刺激Ca2+和IP3的进一步释放，从而活化卵母细胞［2］。

细胞内Ca2+浓度升高不仅释放了停滞于减数分裂中的卵母细胞，随后还触发了胚胎发育程序。Ca2+信号是控制随后的胚胎分裂必不可少的物质。Ca2+振荡的幅度可能会通过激活钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（calcium-CaMdependent protein kinase Ⅱ，CaMK Ⅱ）影响胚胎发育的早期阶段，激发细胞周期以及随后的细胞分裂的启动。……