吴翠翠，吴志坚，宋伶俐

(北华大学附属医院，吉林 吉林 132011)

阴道微生态是一个动态相对平衡的灵敏体系，正常状态下可分离出50多种微生物，易受内、外环境的影响，其中主要优势菌是乳酸杆菌.乳酸杆菌的下降可导致条件致病菌的过多生长，是女性阴道微生态体系失衡的主要原因[1].阴道微生态的改变与人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染有一定的相关性.本研究通过对HPV阳性和HPV阴性患者阴道分泌物白带常规测定，分析阴道微生态的特点和HPV感染之间的关系，探讨通过乳酸杆菌胶囊阴道给药后阴道内环境改变对HPV阳性患者转阴率的影响.

1 资料与方法

1.1 研究对象

对2019年1月—2019年9月北华大学附属医院门诊妇科全检患者进行阴道分泌物采集，行HPV测定.选取HPV阳性和阴性各100例，HPV阳性患者年龄20～68岁，平均(34.3±4.5)岁；HPV阴性患者年龄22～65岁，平均(33.8±5.0)岁，两组数据资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性.

1.2 实验材料

GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统、OLYMPUS CX31 型生物显微镜、阴道分泌物分析试剂盒(长春迪瑞医疗科技股份有限公司)；人乳头瘤病毒(HPV)核酸检测试剂盒(杂交捕获-化学发光法，杭州德同生物有限公司)；基因杂交信号放大系统(DML-2000，杭州德同生物技术有限公司).

1.3 方 法

1.3.1 采 样

患者标本采集前一天禁止性交、盆浴、阴道灌洗及局部给药等，采用无菌的棉拭子从患者阴道后穹隆及1/3处刮取分泌物，置入妇科全检和HPV检测专用采样管内，采样2 h内送检.

1.3.2 阴道分泌物检测

将阴道分泌物分析试纸条从2～8 ℃冰箱取出，平衡至室温18～25 ℃，待用；用无菌拭子采集的样本放入软试管中，每个样本加1.2 mL细胞保存液，反复刷洗拭子，使拭子样本充分洗脱；取出阴道分泌物试纸条，将样本分别滴加试纸上；试纸条放入GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统中，(37±1) ℃温育8 min后，与色标对比判读结果(1 min内).细菌性阴道炎(BV)诊断标准为线索细胞+唾液酸苷梅+白细胞酯酶+脯氨酸氨基肽酶；需氧型阴道炎(AV)诊断标准为过氧化氢酶+白细胞酯酶+β-葡聚糖醛酸酶.

1.3.3 人乳头瘤病毒(HPV)测定

HPV高危型DNA检测主要有2种HPV 亚型(16、18)和12种HPV亚型(31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68)的试剂盒(杭州德同生物技术有限公司)，严格按照人乳头瘤病毒(HPV)核酸检测试剂盒(杂交捕获-化学发光法)说明书操作，在基因杂交信号放大系统(DML-2000)上读取数据，并分析结果.

1.3.4 乳酸杆菌阴道胶囊给药

将100例HPV阳性患者分为50例观察组和50例对照组，其中对照组定期随访，若存在阴道炎的患者接受常规阴道炎治疗；观察组采用乳酸杆菌阴道胶囊给药，患者清洗外阴后，将胶囊置于阴道深部，1次/晚，1粒/次，连续15 d为1个疗程，于月经干净后使用，共3个疗程.

1.4 统计学分析

2 结 果

所有患者行HPV和阴道分泌物白带常规检查，HPV阳性的100例患者中，乳酸杆菌异常83例，滴虫4例，线索细胞43例，唾液酸苷酶阳性43例，β-葡聚糖醛酸酶阳性26例，酸碱度pH升高63例，明显高于HPV阴性患者，差异具有统计学意义(P<0.05)；100例HPV阳性患者中细菌性阴道炎43例，需氧型阴道炎26例，均高于HPV阴性患者，差异具有统计学意义(P<0.05).通过乳酸杆菌胶囊阴道给药，6个月后转阴率为56%，12个月后转阴率为84%，转阴率明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05).见表1～2.

表1 阴道内环境与HPV阳性和阴性结果Tab.1 Results of vaginal environment in HPV positive and negative patients

表2 两组HPV阳性患者转阴率Tab.2 Negative conversion rate of HPV positive patients in two groups

3 讨 论

目前，宫颈癌已经成为威胁女性健康的第二大恶性肿瘤，高危型HPV持续感染是大部分宫颈发生癌变的前提[2].阴道微生态环境的失调导致高危型HPV持续感染，然而大部分患者宫颈感染高危型HPV会自行消除[3]，只有当高危型HPV持续感染时才会发生上皮细胞内瘤变(CIN)，其中部分患者会发展成宫颈癌[4].

正常情况下，女性阴道中微生物以乳酸含量最多，约占所有菌群的90%[5].乳酸杆菌与宫颈高危HPV持续感染有无关系说法不一.LEE等[6]的研究证实了阴道微生物多样性和构成与HPV 感染密切相关，乳酸杆菌还可能具有抵抗HPV 感染的能力.一项横断面研究[7]结果显示：HPV 阳性组的加氏乳酸杆菌数量显著增多，而鸡乳杆菌和惰性乳酸杆菌在HPV阳性组和阴性组之间差异无统计学意义(P>0.05).还有部分学者[8]持有不同意见，认为 HPV 感染与乳酸杆菌数量没有关系.故在以后的研究中，探讨乳酸杆菌与HPV 感染的具体机制，可能对HPV持续感染的治疗提供新思路.

正常阴道菌群之间、菌群与机体之间应保持动态平衡，而当该平衡被打破，需氧菌大量增殖时可导致需氧性阴道炎，主要增殖菌为大肠埃希菌、无乳链球菌等阴性杆菌、球菌.需氧菌感染阴道后，阴道分泌物试纸条显示过氧化氢酶+白细胞酯酶+β-葡聚糖醛酸酶.AV患者的阴道分泌物一般为脓性分泌物,pH>4.5,清洁度一般为Ⅲ～Ⅳ度.VIEIRA-BAPTISTA等[9]观察到，AV会增加宫颈细胞异常的风险，是其独立危险因素，但与HPV感染没有相关性.本研究显示：100例HPV阳性患者中需氧型阴道炎26例，高于HPV阴性的患者，差异具有统计学意义(P<0.05)，与VIEIRA-BAPTISTA等[9]研究结果不一致.AV和HPV持续感染有一定关系，但由于本研究患者例数有限，关于AV与HPV感染相关性还有待进一步研究证实.

细菌性阴道炎(Bacterial Vaginosis，BV) 患者阴道中乳酸杆菌数量少，阴道内多种细菌增加，如阴道加德纳菌、厌氧菌等大量繁殖，正常菌群失调，导致混合感染.BV 的诊断方法较多，本研究采用阴道分泌物分析试纸条(迪瑞医疗科技有限公司)的诊断标准：线索细胞+唾液酸苷梅+白细胞酯酶+脯氨酸氨基肽酶.在育龄期女性中，BV 和高危型HPV(HR-HPV)感染多同时发生.有研究[10-11]表明：女性宫颈高危型HPV持续感染常见细菌多为阴道加德纳菌，BV 患者阴道内乳酸杆菌明显低于正常健康女性，差异具有统计学意义(P<0.05).由于阴道菌群乳酸杆菌的减少，使黏蛋白降解酶(如唾液酸酶)增多，宫颈黏膜屏障发生改变，产生H2O2的数量减少，并影响细胞因子的产生，从而增加HR-HPV感染机会，有研究[12-13]表明：在年龄小于35 岁和大于65 岁的女性中，多类型HPV 感染与阴道pH升高显著相关.

本研究发现：HPV阳性的100例患者中，乳酸杆菌异常83例，滴虫4例，线索细胞43例，唾液酸苷酶43例，β-葡聚糖醛酸酶26例，pH升高63例，明显高于HPV阴性患者，差异具有统计学意义(P<0.05).其中100例HPV阳性患者中细菌性阴道炎43例，需氧型阴道炎26例，白假丝酵母菌14例，滴虫性阴道炎8例，均高于HPV阴性的患者，差异具有统计学意义(P<0.05).本研究结果显示：观察组采用乳酸杆菌阴道胶囊给药，给药6个月及12个月后HPV转阴率分别为56%和84%，明显高于临床随访的对照组，差异具有统计学意义(P<0.05).这表明阴道微生态与HPV 感染具有密切的相关性，通过乳酸杆菌胶囊阴道给药调节阴道内环境，可有效提高HPV阳性患者转阴率，有益于临床治疗.

综上所述，阴道微生态的变化与宫颈HPV阳性的患者具有密切关系，而临床通过应用乳酸杆菌阴道胶囊长期给药显著提高了HPV患者的转阴率，在预防宫颈癌和提高HPV阳性患者转阴率中具有临床指导价值.