李昕华，刘艳华，蔺 勇

(长春市中心医院，吉林 长春 130051)

星形胶质细胞比神经元更能耐受缺血损伤，在应激状态下被激活，通过抗氧化、减轻兴奋性毒性、调节轴突再生对神经元发挥保护作用.研究[1-2]表明：缺血缺氧后，脑内产生的胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF)及其受体增多，对受损脑组织起到保护作用.前期研究[3-4]发现：缺血预处理能增加星形胶质细胞GDNF的表达.本实验通过缺血预处理星形胶质细胞制备出条件培养基(ACM)，沉默GDNF基因后制备另一种ACM，将缺血预处理的神经元培养在不同ACM中，检测神经元凋亡及p-P38MAPK蛋白表达，应用P38MAPK的抑制剂SB203580检测神经元Caspase-3蛋白表达，探讨缺血预处理后星形胶质细胞分泌GDNF抑制神经元凋亡的信号转导途径.

1 材料和方法

1.1 材 料

Wistar大鼠(吉林大学动物实验中心)；高糖DMEM 干粉培养基、胎牛血清及马血清(GIBCO公司，美国)；EGFP表达质粒(武汉晶赛生物技术公司)；兔抗单克隆p-P38 MAPK一抗(Cell Signaling公司，美国)；辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗(Santa Cruz公司，美国)；兔抗大鼠Caspase-3一抗(Boster公司，美国)；吖啶橙、溴化乙啶(南京凯基生物科技发展有限公司)；SB203580(Sigma公司，美国).

1.2 制备条件培养基

大鼠皮层神经元及星形胶质细胞氧糖剥夺模型制备见本课题组前期研究[3-4].

取正常培养的星形胶质细胞培养基，离心15 min后取上清，即为ACM1；前期实验[5]研究发现：OGD预处理及再缺血后星形胶质细胞分泌GDNF，再灌注24 h时表达最高，取这一时间点的星形胶质细胞培养基，离心15 min后取上清，即为ACM2；利用EGFP表达质粒沉默GDNF基因，转染的星形胶质细胞……