含RGD肽类弹性蛋白制备及促HUVECs细胞黏附的影响
2021-01-05崔梅英王明月王冬梅杨泽斌黄莉莉刘宇轩关新刚
崔梅英,王明月,陈 丽,王冬梅,杨泽斌,黄莉莉,刘宇轩,关新刚
(北华大学医学技术学院,吉林 吉林 132013)
弹性蛋白(Elastin)存在于所有脊椎动物组织中,是负责维持组织(如心脏、皮肤、血管、软骨等)弹性的一类细胞外基质蛋白[1],类弹性蛋白多肽(Elastin-like polypeptides,ELPs)借鉴弹性蛋白前体结构组成以五肽串联重复序列单元(Val-Pro-Gly-Xaa-Gly,VPGXG,Xaa可以是除了脯氨酸以外的任意一种氨基酸)为基本结构单位的人造多肽聚合物[2].ELPs具有温度敏感的可逆相变特性,在低于相变温度溶液中呈可溶状态,在高于相变温度溶液中呈凝集状态,而且此过程是可逆的,该特性使ELPs获取过程更为简便、快捷[3-4].ELPs具有理想的机械化学特性、良好生物相容性及可降解性特点,能够通过基因工程方法进行高通量生产,使其成为理想的新型生物医学材料[5],受到生物材料界学者的普遍青睐,成为极具应用前景的生物材料分子之一.
ELPs的机械弹性及完全可降解性提供了一个模拟天然细胞环境的完美人工平台,RGD肽是一系列含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp) 的多肽片段[6],广泛存在于纤连蛋白、层粘连蛋白等多种细胞外基质中,介导细胞与细胞外基质的黏附作用[7].近年来,人工合成的RGD肽在组织工程和肿瘤靶向等研究领域引起了广泛关注[8-9].本研究中,我们表达纯化了含RGD肽的类弹性蛋白(RGD-ELPs)及对照蛋白RDG-ELPs,探讨两种融合蛋白的细胞相容性,比较分析两种融合蛋白对人脐静脉内皮细胞HUVECs黏附表达的影响.
1 材料与方法
1.1 质粒、菌株和主要试剂
pET15b-RGD-ELPs和pET15b-RDG-ELPs质粒(美国斯坦福大学Sarah C H教授惠赠);……