李 姣， 任秋蓉， 古 蕾， 朱晓换， 王亚男

（四川师范大学 生命科学学院，四川 成都610101）

为了控制植物病毒引起的植物病害发生和防止植物病毒在国家和地区之间传播，必须对植物进行病毒检测.植物病毒检测在无病毒植物组织培养的过程中（特别是在脱除病毒之后）是重要环节之一.长期以来，人们一直致力于开发简单有效的植物病毒检测方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）［1-4］、逆转录聚合酶链反应（RT -PCR）［5-7］、real -time RT -PCR［8-9］、逆转录环介导等温扩增反应（RT - loop - mediated isothermal amplification，RT-LAMP）［10-11］、微阵列［12］和下一代测序［13］等.其中，灵敏度高且操作较简便的方法是RT-PCR，已被广泛应用于病毒检测［14-18］.

在采用RT - PCR 技术检测植物病毒的过程中，第一个步骤是通过分离和纯化RNA 获得RNA模板.RNA的分离是一项技术性强、耗时长的工作，需要一定量的植物材料和几个离心步骤.RNA提取后，还必须对RNA提取液进行纯化，以获得高质量的RNA模板.在提取和纯化的步骤中，操作人员的技术错误可能会导致RNA 污染或降解等问题，从而使检测结果出现假阴性、假阳性等错误［14，18］.因此，目前RT -PCR 检测植物病毒的方法存在RNA模板制备较困难的缺点.

简化RNA模板的制备过程将有助于提高植物病毒检测的效率，降低检测成本，并能极大地促进RT-PCR在其他领域的应用.一种称为微量组织直接RT -PCR 反应（Microtissue direct RT -PCR）的简单快速的RNA模板制备方法最初由Hosokawa等［19］于2006 年提出，有效检测了菊花植株中的2种类病毒，即菊花矮化类病毒（CSVd）和菊花褪绿斑驳类病毒（CChMVd）.他们的研究发现，无菌注射器针头（25 G）比剃刀更适合于CChMVd的检测，而且在高浓度和低浓度类病毒感染的菊花植株中均能检测到类病毒.然而，此后未有微量组织直接RT-PCR反应检测其他植物病毒的研究，由此人们对该方法产生了2 个疑问：该方法是否只局限于菊花类病毒检测？……