刘 笑

（辽宁省检验检测认证中心（辽宁省农产品及兽药饲料产品检验检测院），沈阳 110036）

长期以来，生鲜乳都凭借其丰富营养价值备受人们喜爱，随着人们物质生活条件水平的快速提升，市场对生鲜乳供应需求迅速增大，促进了我国奶牛养殖业规模化发展。在此过程中，一旦生鲜乳中出现残留抗生素情况，则会难以保证食品安全，给人体正常机能造成破坏，十分不利于儿童健康成长发育。鉴于此，本文从实际出发，分析了生鲜乳中抗生素残留的检测要点，旨在通过检测技术的科学应用，保证生鲜乳质量，推动我国奶牛养殖业健康、持续进步发展。

1 检测材料准备要点

技术人员按照规范无菌操作标准在养殖户进行样品抽取，明确检测所需生鲜乳样品，科学保存与运输，保证样品能够满足检测需求。样品送至实验室后，将MC培养基和嗜热乳酸链球菌准备好，同时准备标准对照牛乳、氯化三苯基四氮唑等试剂，一般情况下对照牛乳来源为质量检验监督部门进行提供，实验所需检测仪器包括灭菌试管、灭菌吸管、温度计（100 ℃规格）、天平、恒温培养箱、水浴锅、温箱等。

掌握以上检测材料准备要点，能够给接下来的生鲜乳中抗生素残留的检测技术顺利应用打好铺垫基础，是检测技术水平和质量的基础保证，应引起重视，不可掉以轻心忽略准备事宜。

2 掌握检测方法原理

检测技术人员使用国标TTC（食品安全国家标准食品微生物学检验标准汇编GB4789 系列2010 版，已根据卫生部2010年5月26日的勘误公告进行更新）检测法，依据实验检测要求掌握应用原理，在生鲜乳样品中放入菌种，科学培养菌种，观察菌种一定时间内的变化，接着加入TTC 指示剂，此时样品发生颜色变化，根据不同颜色确定生鲜乳内各种抗生素的真实残留情况。处于不增殖状态的生鲜乳菌种，并不会出现还原显色情况，处于增殖状态的生鲜乳菌种，可看见变成红色的变化。

3 掌握采样技术应用要点

生鲜乳样品规格通常为500 mL，经过消毒处理后盖上样品瓶盖，使用习惯从样品瓶内取出25 mL 用以备检，将其向锥形瓶内（已含有灭菌生理盐水225 mL）导入，人工手摇操作令锥形瓶内溶液均匀，保持室内处于约15 ℃温度环境，采取3500 r·min-1的速度进行10 min离心操作。完成以上步骤后，取出最上层脂肪，向另外装置导入剩下的脱脂乳并安全存放管理。

4 掌握菌种使用要点

规范移种菌种，脱脂乳作为培养基，培养环境为恒温状态，控制培养时间超过15 h，控制温度约36 ℃即可，灭菌脱脂乳后，进行1:1稀释操作，合理存放。

5 掌握试验指示剂调剂要点

检测技术人员要注意标品的准确称量，严格控制使用量为TTC 1 g，将其装进烧杯内，向烧杯倒入24 mL 蒸馏水，直到烧杯内液体处于均匀状态，再向棕色瓶导入，存放于冰箱内（7 ℃），使用指示剂时需稀释，按照1:5的比例稀释即可，当发现溶液呈现淡褐色、玉色情况时，指示剂不可再继续使用。

6 严格规范试验操作步骤

首先，加热处理样品，将9 mL样品取出，导入试管内（160 mm×160 mm 规格），采取水浴方式对试管加热处理，控制加热时间5 min，控制试管处于80 ℃温度条件，完成加热操作后冷却试管，直到温度低于37 ℃。

其次，接种处理。向水浴内（36±1℃）放入活性菌液（1 mL），控制培养时间2 h。

再次，显色阶段。把4%浓度TTC指示剂按照1:5比例进行稀释，将其中0.3 mL 取出来，导进水浴内开始培养，控制培养时间30 min，观察颜色变化现象。

最后，复检阶段。准备一式两份检测样品，当第1 次检测呈现阳性结果时，需采取2 次检测操作，同时开展阴阳性对照分析工作，将TTC、菌液、抗生素加入8 mL 无抗生素生鲜乳内，作为复检阳性对照组，将TTC、菌液、加入9 mL无抗生素生鲜乳内，作为复检阴性对照组。

7 掌握试验判定要点

观察水浴内培养发生的颜色变化时，要做到快速、及时，注意避光，当抗生素残留于生鲜乳内，菌液放入检测样品进行培养观察后，没有增殖现象出现，原因在于中实际加入进入未被还原，因此颜色没有变化。当没有抗生素残留于生鲜乳内，可观察到增殖现象，被还原的TTC 呈红色变化。判定试验时，发生红色变化，可作出阴性判定结果，为原色情况，则可作出阳性判定结果。

8 抗生素残留原因分析和控制对策

引起生鲜乳内抗生素残留的原因并不是单一的，在具体分析时要结合实际情况而行，常见原因包括以下几方面：养殖户面对动物疫病现阶段的多样化发展趋势，盲目使用抗生素治疗，由于用药不合理、混合用药等引起残留问题；养殖户没有进行科学的修养期管理和执行，引起抗生素超标残留在生鲜乳内的问题；养殖人员将一定量抗生素加入饲料内，奶牛通过饲料摄入提升了细菌耐药性，自身免疫力降低，引起了体内残留超标抗生素的问题。

针对以上情况，需加强对奶牛养殖抗生素使用的控制工作才能够最大限度避免生鲜乳中发生抗生素残留情况。在具体实践中，可通过严格执行休药期；动态监管抗生素使用；做好环境卫生管理；落实抗生素药敏试验；构建科学合理奶牛养殖模式；引入先进奶牛养殖技术；按时接种疫苗加强疫病防治等途径，多角度、全方位降低生鲜乳中抗生素残留几率，保障我国奶牛养殖业良好发展。