付 莉，韩桂茹△，兰新财，赵丽丽

（1.河北省药品检验研究院，河北 石家庄050011；2.浙江金大康动物保健品有限公司，浙江 金华301016）

石榴皮是临床止泻常用药材，具有涩肠止泻[1-3]、止血、驱虫[4]之功效，用于久泻、久痢、便血、脱肛、崩漏、带下、虫积腹痛。其主要含鞣质类和黄酮类化合物[5]，如没食子酸、鞣花酸等，黄酮类化合物包括木犀草素、山柰酚、槲皮素、芹菜素和柚皮素及其与糖结合成的苷类等，包括脂溶性、中极性和水溶性成分。石榴皮的薄层鉴别鲜有报道，目前多以鞣酸类成分为指标[6-8]，以酸性展开剂进行鉴别。2015年版《中国药典（一部）》石榴皮药材的薄层鉴别方法[9]烦琐、费时，且需有机溶剂110 mL。有机溶剂的蒸干严重污染环境，且检测信息单一，不利于质量的控制。若供试品溶液不经反复萃取、除杂、排除鞣酸聚合物，以酸性展开剂展开的薄层色谱图中都会出现部分斑点拖尾[6]，很难获得所有斑点都分离良好的色谱图。为给石榴皮药材及其不同工艺制备的多种制剂提供简便、快捷、低成本、高效率的多信息鉴别方法，本研究中对10批石榴皮药材进行了快速多信息梯度薄层鉴别研究。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

KH-100B型超声波清洗仪（昆山禾创超声仪器有限公司，功率为200 W，频率为50 kHz）；2F-2型三用紫外仪（上海安亭电子仪器厂）；AX205DU型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度为万分之一）。

1.2 试药

石榴皮药材由浙江金大康保健品有限公司提供，经河北省药品检验研究院段吉平中药师鉴定为正品；石榴皮对照药材（批号为121043-201304，中国食品药品检定研究院）；环己烷、乙酸乙酯、甲醇、三氯甲烷（分析纯，天津市百世化工有限公司）；浓氨试液（分析纯，石家庄市华迪化工工贸有限公司）。

2 方法与结果

2.1 石榴皮药材脂溶性成分

取石榴皮药材和对照药材各0.5 g，研细，分别加70%甲醇2 mL，超声处理20 min，取上清液作为供试品溶液和对照药材溶液。吸取供试品溶液和对照药材溶液各6～8μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-浓氨试液（5∶3∶0.5，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点；再在日光下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的主斑点。详见图1。

2.2 石榴皮药材中极性成分

吸取2.1项下供试品溶液和对照药材溶液各6～8μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（8∶2∶4∶0.5，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的主斑点。详见图2。

2.3 石榴皮药材水溶性成分

吸取2.1项下供试品溶液和对照药材溶液各6～8μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（1∶2∶4∶0.5，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的主斑点。详见图3。

3 讨论

3.1 定义中药材梯度多信息薄层鉴别

图1石榴皮脂溶性成分薄层色谱图

图2石榴皮中极性成分薄层色谱图

图3石榴皮水溶性成分薄层色谱图

是将高效液相梯度洗脱的含义引申到中药薄层鉴别领域，将中药材中的脂溶性、中极性及水溶性成分，依据相似相溶的溶解定律，按非极性、中极性、极性的梯度顺序，将药材中的大部分有效成分，按极性大小，在极少数的薄层板上，多种检视条件下，获得尽可能全的斑点信息图谱，得到从脂溶性成分到水溶性成分的多信息薄层色谱图和鉴别方法。

3.2 3种不同极性的梯度展开剂选择

在3块薄层板上，检出的主斑点是不一样的，说明检出的是极性不同的成分；且每块薄层板上，各自3种检视条件下，检出的成分不完全相同；由图3 A至图3 B可知，亮蓝色荧光斑点形状不同，证明不是同一种成分，发挥了不同检视条件下的信息斑点互补；3块薄层板共检出互不重合的信息斑点17个，经确认这些斑点均无没食子酸。

3.3 优势

本方法简便、快捷，药材与对照药材只需用含水甲醇超声处理，上清液点样，展开，在不同检视条件下检视即可；只需药材与对照药材各0.5 g，前处理溶剂4 mL，时间20 min，与2015年版《中国药典（一部）》收载的石榴皮薄层鉴别需药材3 g、提取溶剂110 mL、总提取溶剂220 mL（加上对照药材的提取）、时间3 h、且斑点单一相比，该薄层鉴别方法具有节约资源、提高效率、减少环境污染、提升质量监督指标的实用价值。本鉴别方法与已报道方法的不同之处还在于，非极性、中极性和水溶成分的展开剂都是碱性的，而已报道方法展开剂都是酸性或偏酸性的，碱性展开剂使一些酸性物质的酯键水解成盐，以离子体形式存在，克服了多酚羟基化合物或其聚合体的拖尾现象，使各斑点收缩、集中，而呈现出的各成分虽相互交叉，但在不同检视条件下，互不干扰，都能呈现出清晰的颜色斑点或荧光斑点。