徐娜 刘志敏 栾竹青

摘要：建立肌肉组织中氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑药物残留的液相色谱质谱联用的检测方法。样品经乙酸乙酯提取后，水和乙腈为流动相梯度洗脱，质谱正负源切换进行定性定量分析，氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素的定量限为0.1ug/kg，甲硝唑、地美硝唑和洛硝哒唑的定量限为1.0ug/kg。

关键词：组织；氯霉素；甲硝唑；液相色谱质谱

1. 引言

随着生活水平的提高，人们越来越重视食品安全，希望吃的食物能够健康放心。人们开始关注药物残留的问题，特别是人畜共患药的残留对人体的伤害很大，GB31650-2019标准中规定氯霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑在动物性食品中不得检出，氟苯尼考、甲砜霉素在动物性食品中规定了最大高残留限量。这次我们主要研究了肌肉组织样品通过乙酸乙酯提取，能够同时检测氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑药物的残留。

2. 实验部分

2.1 试剂与仪器

乙酸乙酯；德国默克，色谱纯；甲醇；德国默克，色谱纯；标准品 DR公司，纯度99%

液相色谱串联质谱仪 AB5500，配有电喷雾离子源；分析天平；美国奥豪斯；冷冻离心机；美国贝克曼；

2.2 标准品溶液的配置

分别称取1 0 m g（精确至0.001mg）的标准品于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配成100mg/l的标准溶液。

2.3样品的处理

称取均匀的样品5.00g于50ml离心管中，加入50ul 40ug/l氯霉素D5内标溶液、50ul 100ug/l的替硝唑溶液、20ml乙酸乙酯涡旋混匀，5000r/min离心，取上清液于100ml鸡心瓶瓶中，残渣再加入20ml乙酸乙酯涡旋混匀，离心，合并上清液于40℃旋转蒸发仪浓缩，最后用氮气吹干，用1ml的1+9乙腈水溶液溶解，加1ml正己烷涡旋静置，取1ml下层液于1.5mlEP管中，于10000r/min离心机离心5min，取下层液过0.22um滤膜上机检测。

2.4 色谱质谱条件

液相条件：C18色谱柱，流速0.3ml/min，流动相水和乙腈梯度洗脱。

质谱条件：电喷雾离子源，正、负离子扫描，多反应监测，喷雾电压、气帘气、雾化气、碰撞能量调节使质谱灵敏度达到最佳。

3. 结果

3.1 色谱质谱条件的优化

流动相优化如下：

色谱柱：C18，100mm*2.1mm*5um或相当，柱温30℃。流动相：水，乙腈，流速0.3ml/min。

3.2 质谱条件

A. 离子源：电喷雾离子源ESI

B.扫描模式：正、负离子扫描

C.检测方式：多反应检测（MRM）

D.喷雾电压：正5500V，负 4500V

C.气帘气35，雾化气50

D.定量定性离子和碰撞能量条件如下表。

3.3 回收率实验

取一阴性样品中分别添加定量限的1倍、2倍、3倍，3个浓度6个平行样品的混合标准溶液，其回收率结果均大于80%，平行样品间的相对标准偏差均在10%以内，满足检测的要求。

4. 讨论

4.1 样品提取及净化的选择

样品用乙腈、乙酸乙酯、甲醇溶剂提取，乙腈和甲醇的提取效果、回收率不如乙酸乙酯，但是乙酸乙酯提取的杂质较多，提取后用正己烷除脂，也可以考虑C18固相萃取小柱净化，C18小柱的净化效果较好，最后综合考虑，选用乙酸乙酯提取，正己烷净化，这样既省事又省费用。

4.2 基质效应

由于基质效应，可以用阴性的基质配制基质标曲来消除基质效应；也可以用内标溶液，但是内标较贵，可以将性质相近的药品选用一个内标，我们将氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素用氯霉素-D5做内标，甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑用替硝唑做内标，这样可以消除部分误差。

4.3 流动相的选择

我们用甲醇-水、甲醇-0.1%的甲酸水、乙腈-水、乙腈-0.1%的甲酸水做流动相，做了实验，综合考虑峰形、灵敏度、基线噪音等因素，选择乙腈-水作为流动相。

5. 总结

利用正负源切换的方式同时检测氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑，其中氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素定量限为 0.1ug/kg，甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑定量限为1.0ug/kg，对于检测人员来说，既节省了时间又方便了操作，同时也节省了费用。

作者简介：

通讯作者：徐娜（1980-），女，汉，山东省烟台市人，本科，工程师；研究方向：食品检测

刘志敏（1982-），男，汉族，山东省菏泽市人，研究生，副高级工程师；研究方向：食品检测

栾竹青（1989-），女，汉族，山东省烟台市人，研究生，工程师；研究方向：食品检测