王朋涛，梁秀丽，徐盟龙，赵福杰，闫晓光，魏战勇, 3*

(1. 河南农业大学牧医工程学院，河南 郑州 450002；2. 安阳工学院，河南 安阳 455000；3. 河南省动物性食品安全重点实验室，河南 郑州 450002)

干扰素(interferon, IFN)是一类具有抗病毒、抑制细胞增殖等多功能糖蛋白，在适应性免疫调节中起着重要作用[1]。干扰素在病原入侵机体时诱导相关抗病毒蛋白的表达，例如：蛋白激酶R、干扰素诱导黏病毒抵抗蛋白等[2-4]，使机体处于抗病毒状态。干扰素广泛用于养殖业，在蓝耳病、口蹄病等病毒性疾病治疗中效果显著[5-6]。

猪α干扰素基因编码166个氨基酸，其空间结构主要由5个α螺旋组成，无内含子，有至少17个亚型[7-8]。猪α干扰素在机体内分布广泛，但表达量较低，无法满足生产需要[9]。因此许多学者利用基因工程对猪α干扰素进行研究。Lefevre等[10]对猪α干扰素进行体外克隆、基因序列分析和少量表达。陈涛等[11]改变猪α干扰素第86 位氨基酸, 并对其密码子进行优化，获得蛋白活性为52 000 IU/mg的突变体。李爽等[12]改变猪α干扰素不同的氨基酸活性位点，获得了蛋白活性为2.97× 108IU/mg的突变体。本研究将天然猪α干扰素的第58位组氨酸H、59位谷氨酸E及61位亮氨酸L分别突变为酪氨酸Y、天冬氨酸N及丝氨酸S，成功构建了猪α干扰素YNS突变体，运用大肠杆菌系统表达纯化后，其抗病毒活性与天然猪α干扰素相比明显提高，为干扰素的临床应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 质粒与菌株

含有猪α干扰素基因的重组质粒、原核表达载体pET-32a、大肠杆菌感受态细胞DH-5α和Rosetta(DE3)由河南省动物性食品安全重点实验室保存。……