杨帆，马玲，王玮琳，李玥，刘金华，王伟利,*

(1. 长春海关技术中心，吉林 长春 130062；2. 吉林农业大学动物科学技术学院，吉林 长春 130118)

H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)于1975年首次从美国绿头鸭体内分离出来，曾以低致病性状态在美国、德国、瑞典等国家的水鸭中流行，很少对禽类动物产生影响[1]。2013年12月，江苏省一活禽市场首次监测到H5N6亚型AIV[2]。不久，该疫情在老挝、越南、韩国、日本及东南亚等国的禽类中广泛流行[3]。2015年8月，广东清远一家养殖场禽鸟患H5N6亚型禽流感，近3万只禽鸟被扑杀处理[4]。2017年3月江西省约有1.5万只鸡发病；同年10月，甘肃、湖北等地发病家禽3.4万多只。2018年3月广西省发病禽数量达2.8万只，同年下半年陆续发生5起H5N6亚型高致病性禽流感，共有8万多只家禽被扑杀，监测数据显示，我国长三角以南地区疫情比较严重[5]。2014年5月，全球首例人感染H5N6亚型AIV的病例出现在中国四川省，随后我国多个省市报告了人感染新型H5N6亚型AIV的情况[6]。2013年前，我国主要流行的H5亚型AIV有H5N1、H5N2亚型。2013年之后，H5亚型AIV流行的势态呈现出以H5N1、H5N6和H5N8多种NA基因亚型共存的现象[7]。H5N6亚型AIV不仅对养禽业造成巨大经济损失，还对公众健康造成威胁，所以加强对H5N6亚型AIV快速、准确检测非常重要。由于H5N6亚型AIV核酸检测用的标准物质缺乏统一定量标准，为了保证PCR、荧光定量PCR及其他分子生物学核酸检测的准确性，本研究针对H5N6亚型AIV的HA和NA基因进行扩增，构建出体外转录标准物质，为H5N6亚型AIV的HA和NA基因核酸检测提供了有效的质控标准。

1 材料与方法

1.1 毒株

H5N6亚型灭活毒株……