郭 定 环， 王 竞， 顾 晨， 郭 雅 丽

( 大连理工大学 环境学院, 辽宁 大连 116024 )

0 引 言

目前仅仅发现了无光环境中细菌产生胞外ROS的现象，但黑暗条件下细菌形成胞外ROS的影响因素、反应条件和动力学特性等研究则未见报道.基于此，本文开展无光条件下海洋Pseudoalteromonassp. GCY产胞外ROS特性研究.

1 材料与方法

1.1 菌株与培养基

1.2 实验方法

表1 OPs的浓度范围

1.2.3 酶活性测定 测定菌株生长期内，胞外过氧化氢酶(catalase，CAT)活性和LAAO活性.向胞外液中加入等量、足量的H2O2，使终浓度约为100 μmol/L，定义25 ℃、避光条件下，1 h去除100 μmol/L H2O2的CAT活性为100%；向胞外液中添加足量L-亮氨酸，使终浓度为5 mmol/L，定义1 h内增加5 μmol/L的H2O2时LAAO酶活性A为100%[20].

1.3 分析方法

生物量用D(600 nm)表示，用紫外-可见分光光度计(光谱仪器SP-756P)测定；H2O2测定采用N，N-二乙基对苯二胺/辣根过氧化物酶法[21]；数据处理和图像绘制采用Origin软件.

2 结果与讨论

2.1 基质对ROS胞外形成特性的影响

不同基质、不同浓度条件下，菌株GCY生长情况和产胞外H2O2存在差异(图1)，6 g/L浓度的基质能基本满足菌株生长需要，对数期没有检出H2O2，稳定期H2O2浓度逐渐升高.综合考虑菌株胞外H2O2浓度和生物量情况，选取6 g/L的蛋白胨和牛肉膏进行后续研究.在6 g/L的蛋白胨和牛肉膏体系中，虽然菌体生物量基本一致，H2O2的浓度变化趋势也相同，但是，两体系中H2O2的浓度存在较大差别，其中，蛋白胨体系中H2O2的最大浓度为(1.5±0.1) μmol/L，而牛肉膏中达到(8.1±0.6) μmol/L.综上所述，菌株在蛋白胨和牛肉膏体系中均能产生H2O2，而在牛肉膏体系中浓度更高；另外，H2O2的产生与菌株的生长期有关.

(a) 蛋白胨

(b) 牛肉膏

图2 不同浓度……