许宇振 赵成仕

摘 要：目的：调查安徽省包装饮用水和饮用天然矿泉水中铜绿假单胞菌的污染情况，为提高成品饮用水市场的安全性和规范性提供帮助。方法：采用GB/T 8538-2008中铜绿假单胞菌的检测方法，对366份包装饮用水和饮用天然矿泉水样品进行检测。结果：241份包装饮用水中检出铜绿假单胞菌22份，检出率为9.13%;125份饮用天然矿泉水中铜绿假单胞菌检出5份，检出率为4.00%;102份桶装水中检出铜绿假单胞菌19份，检出率为18.63%;总共27份检出的样品中，桶装水占比68.18%。结论：安徽省包装饮用水和饮用天然矿泉水存在较高的铜绿假单胞菌污染现象，尤其是桶装水的检出率较高，生产企业和监管部门应加大产品质量检查力度，确保成品饮用水的安全。

关键词：包装饮用水;饮用天然矿泉水;铜绿假单胞菌

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeru-ginosa）为革兰氏阴性杆菌，其对不良环境的耐受力强，广泛存在于水、土壤、空气以及人与动物的皮肤和肠道

中[1-2]。铜绿假单胞菌具有多种致病因子，能够导致人类的皮肤炎症和急性肠道疾病，是重要的水源性和食源性致病菌，同时也是重要的医源性致病菌[3]。近年来，饮用水中的铜绿假单胞菌污染情况也越来越被重视。我国也在国家标准中明确规定了铜绿假单胞菌的限量值[4-5]。本文对556份成品饮用水中的铜绿假单胞菌进行了检测和分析，以期为饮用水企业及时发现问题，保证成品饮用水产品质量以及监管部门的分析决策提供一定帮助。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验样品为2019年6月到2020年5月采集的生产环节和流通环节的包装饮用水和天然饮用矿泉水样品。

1.2 仪器与试剂

高压蒸汽灭菌锅（上海博讯YXQ-LS-75SⅡ），超净工作台（苏净安泰SW-CJ-2FD），生物安全柜（苏净安泰BSC-1304ⅡA2），生化培养箱（上海三发SHP-160）。

铜绿假单胞菌基础培养基（CN琼脂）、营养琼脂、绿脓菌素测定用培养基、金氏B培养基、乙酰胺液体培养基、氧化酶试纸、钠氏试剂等均购自北京陆桥计数股份有限公司，无菌滤膜购自广东环凯微生物科技有限公司。

1.3 试验方法

按照GB 8537-2016《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》中的第57条铜绿假单胞菌检测方法对样品进行检测[6]。

1.3.1 水样处理

在超净台中将250 mL水样通过滤器中的0.45 μm无菌滤膜过滤，过滤后的滤膜平铺于CN琼脂平板上，36 ℃

倒置培养48 h。

1.3.2 验证试验

观察并计数CN琼脂平板上的菌落。计数所有蓝色或绿色（绿脓色素）的可疑菌落，进行绿脓菌素确证试验;紫外灯下观察菌落，计数所有发荧光但是不产绿脓色素的可疑菌落，进行乙酰胺肉汤确证试验;计数所有红褐色不发荧光的可疑菌落，进行氧化酶、乙酰胺和金氏B培养基确证试验。

1.3.3 菌落计数

经验证试验确认的铜绿假单胞菌的比例乘以滤膜上的可疑菌落数，即为每250 mL该样品中铜绿假单胞菌的菌落数。

2 结果与分析

2.1 饮用水中铜绿假单胞菌污染情况

本文检测了生产环节和流通环节的包装饮用水和天然饮用矿泉水样品共366份。GB 8537-2018《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水》和GB 19298-2014《食品安全國家标准 包装饮用水》中均规定的铜绿假单胞菌的限量要求为n=5，c=0，m=0，即检测的5份样品中均不得检出铜绿假单胞菌。经检测，共27份样品检出铜绿假单胞菌，其中12份样品为仅产生绿脓菌素的菌株，2份样品为仅发荧光但不产绿脓菌素的菌株，8份样品中的铜绿假单胞菌既有产绿脓菌素的菌株，又有发荧光但不产绿脓菌素的菌株，5份样品中的铜绿假单胞菌包含有1.3.2所述的全部3类菌株。铜绿假单胞菌的检出率为

7.38%。

2.2 包装饮用水和饮用天然矿泉水中铜绿假单胞菌污染情况

本文检测的366份样品中，包装饮用水为241份，检出铜绿假单胞菌的样品数为22份，检出率为9.13%;饮用天然矿泉水为125份，其中有5份样品检出铜绿假单胞菌，检出率为4.00%（表2）。饮用天然矿泉水的铜绿假单胞菌污染情况明显低于包装饮用水。

2.3 桶装水和瓶装水中铜绿假单胞菌污染情况

本文检测的安徽省各地区的桶装水和瓶装水中铜绿假单胞菌污染情况如表3所示。桶装水共检测了102份，铜绿假单胞菌检出19份，检出率为18.63%;瓶装水共检测了264份，铜绿假单胞菌检出8份，检出率为3.03%;瓶装水中的铜绿假单胞菌检出率明显低于桶装水。

2.4 铜绿假单胞菌检出样品分析

在27份铜绿假单胞菌检出样品中，桶装水为19份，占检出样品的70.37%;包装饮用水检出22份，占检出样品的81.48%。在22份检出包装饮用水中，桶装水为15份，占检出包装饮用水样品的68.18%，瓶装水为7份，占检出包装饮用水样品的31.82%。

3 讨论

铜绿假单胞菌作为完全致病菌能够产生内毒素和其他致病因子，且具有多种耐药机制，对人体尤其是抵抗力较低的老幼病孕人群具有高致病性，因此WHO建议免疫低下的人群不饮用瓶装水[7]。而随着人们生活水平的提高，对瓶装水和桶装水的需求也在日益增加，这就需要生产企业增强对产品质量的把控，市场监管部门加大对饮用水的监督检查力度，尽快尽量降低成品饮用水中铜绿假单胞菌的检出率。

本次试验中，铜绿假单胞菌的检出率为7.38%，桶装水检出率为18.63%，说明安徽省包装饮用水和饮用天然矿泉水存在铜绿假单胞菌污染的问题，且检出率较高[8-9]。桶装水的检出率明显高于瓶装水，这可能是由于桶装水使用的包装材料是回收利用的，包装桶的消毒方式不正确或者消毒不彻底会造成交叉污染，且桶装水在运输、搬运过程中可能会出现封口松动泄露的问题从而造成污染。虽然桶装水的检出率较高，但是瓶装水的铜绿假单胞菌的检出率也达到了3.03%，在27份检出样品中，依然有8份非桶装水检出了铜绿假单胞菌，占检出样品的29.63%。这说明除了包装和运输之外，水源本身的污染和水源的灭菌效果也是导致铜绿假单胞菌检出的重要因素。

参考文献

[1]Schroth MN， Cho JJ， Green SK， et al. Epidemiology of Pseudomonas aeruginosa in agricultural areas[J]. Journal of Medical Microbiology， 2018， 67（8）：1191-1201.

[2]Moradali MF， Ghods S， Rehm BH. Pseudomonas aeruginosa lifestyle： a paradigm for adaptation， survival， and persistence[J]. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology， 2017，7（4）：1-20.

[3]Imanah EO， Beshiru A， Igbinosa EO. Antibiogram profie of Pseudomonas aeruginosa isolated from some selected hospital environmental drains[J]. Asian Pacific Journal of Tropical Disease， 2017， 7（10）：930-935.

[4]中华人民共和国国家卫生健康委员会，国家市场监督管理总局.

GB 8537-2018中华人民共和国国家标准食品安全国家标准饮用天然矿泉水[S].北京：中国标准出版社，2018.

[5]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.GB 19298-2014中華人民共和国国家标准食品安全国家标准包装饮用水[S].北京：中国标准出版社，2014.

[6]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.GB 8538-2016中华人民共和国国家标准食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法[S].北京：中国标准出版社，2016.

[7]Gowri R， Avendano EE， Jeffrey C， et al. Risk factors for hospitalized patients with resistant or multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa infections： a systematic review and meta-analysis[J]. Antimicrobial Resistance and Infection Control， 2018， 7（1）：79.

[8]王文娟，颜瑛，罗玉彬，等.江西

省矿泉水和包装饮用水中铜绿假单胞菌污染情况分析[J].中国卫生检验杂志，2017（3）：124-126.

[9]郭辽朴，仁蕴慧，牛世文.2013-2014年漯河市桶装饮用水中铜绿假单胞菌污染状况调查[J].中国卫生工程学，2017（1）：37-39.