陈苏维,崔钰莹,侯碧巍,张唯玉,鲁佳佳

(安康学院 现代农业与生物科技学院,陕西 安康 725000)

前言

盘基网柄菌是美国国立卫生研究院公布的10种模式生物之一，正常情况下以单细胞形式生存繁殖，食物缺乏即分泌环腺苷酸(cAMP)吸引周围单细胞汇集成多细胞 "蛞蝓(slug)"[1～2]。此单细胞和多细胞共存的生活史使其展现出多种表现型，如生长、分裂、趋光性和趋热性等，而这些特征使得研究高等生物基因型与表现型间的复杂相关性变得简单且可操作性强[3～5]。

DJ-1最初被认为是一种原癌基因，与人类肿瘤和癌症发生相关，在精子的成熟和受精方面也起重要作用[6]。自从Bonifati等在帕金森病人家族内发现DJ-1基因突变型，证实DJ-1也与帕金森病发生相关，且具有遗传规律性[7]。关于DJ-1的功能和与其它基因之间的互相作用，一些学者进行了探索[8-11]，但研究结果尚未完全阐明其作用机制，而且研究结果之间存在一定差异。本研究通过对盘基网柄菌DJ-1基因进行克隆和生物信息学分析，旨在为后期利用盘基网柄菌模型研究DJ-1基因的功能和作用机制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

实验所用菌株为大肠杆菌E.coliDH5α和盘基网柄菌D.discoideumAX2，其信息见表1。pUC18质粒，限制性内切酶EcoRI和NdeI，Taq DNA聚合酶，PureLinkTM Quick Gel Extraction Kit购自上海生物工程有限公司。

表1 实验菌株及其基因型

1.2 方法

1.2.1 盘基网柄菌总基因组提取 从生长克雷伯氏菌(Klebsiellaaerogenes)的标准培养基上收集大约107个盘基网柄菌细胞，2 500 r·min-1室温离心30 s，将收集的细胞用盐溶液冲洗4次去除残留的克雷伯氏菌，然后用1 ml DNAzol 4 ℃放置30 min对细胞进行裂解。……