刘金星　况薇

【摘  要】目的：针对同一病人的石蜡组织PCR结果不同的现象，分析可能出现的原因及应对措施。方法：采用双盲翻倍实验方法，对两组PCR结果进行分析。结果：A、B两组实验结果显示2张（±）、4张（+）、8张（+）。结论：石蜡取材准确与否，直接影响PCR扩增结果准确性，为避免结果不一致，需先镜下定位取材部位，装管的石蜡组织片厚度为5微米，数量以大于两张为宜。

【关键词】石蜡;HPV检测

【中图分类号】R737      【文献标识码】A      【文章编号】1672-3783（2020）06-0292-01

以宫颈癌为代表的宫颈病变是一种发病率较高的妇科疾病，是威胁妇女健康的最为严重的疾病之一，90%的宫颈癌是由人乳头瘤状病毒持续感染引起[1-3]，发病率近十年来持续上升并趋于年轻化，目前，HPV分型的检测方法主要有杂交法和以聚合酶链式反应（PCR）为基础的两大类，我们采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的HPV基因分型检测技术，对同一患者的宫颈石蜡组织进行双盲翻倍实验，对实验结果进行分析，旨在讨论出现结果不同的原因及解决方法。

1 材料与方法

1.1 材料  leica石蜡切片机、刀片、镊子、75%酒精、医用棉签、1mlEP管、记号笔、待检石蜡组织块、裂解液、金属浴、离心机（13000r/min）、加样枪（1-10ul/10-1000ul）、PCR扩增仪、膜条、PCR杂交仪、自备试剂20×SSC（175.3gNacl、88.2g柠檬酸钠，加蒸馏水800ml溶解，用浓盐酸调PH值至7.0，定容至1000ml，高压灭菌保存）、10%SDS（20gSDS加蒸馏水180ml溶解，用1N HCL调制PH7.0，定容至200ml）、1M柠檬酸钠（294.1g柠檬酸钠加蒸馏水700ml溶解，用浓HCL调制PH5.0，定容至1000ml）、A液（100ml 20×SSC，10ml10%SDS加纯化水定容至1000ml，常温保存）、B液（25ml20×SSC，10ml10%SDS加纯化水定容至1000ml，常温保存）、C液（100ml 1M柠檬酸钠加纯化水定容至1000ml，常温保存）、显色液（19ml C液加入1mlTMB和1ul30%H2O2）等。……