郭玮玮,秦悦,杨海波,米占虎

（宁夏医科大学总医院创伤骨科,宁夏 银川 750001）

脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）具有自我更新和多向分化潜能，可用于再生或修复骨组织［1］。与骨髓来源的间充质干细胞比较，ADSCs 组织来源更丰富，细胞增殖速度更快［2］。然而，尽管有大量研究ADSCs 可分化为多种谱系，但ADSCs 分化的分子机制仍不明了。长链非编码RNA（long non-coding RNA，LncRNA）和微小RNA（miRNA）在成骨细胞分化中起关键作用［3-4］。研究［5］表明：LncRNAKCNQ1OT1 通过激活Wnt/β-catenin 通路促进成骨分化以减弱骨溶解。LncRNA H19 的异常表达与成骨分化有关［6］。细胞实验［7］表明：LncRNA 肺癌转移相关转录本1（metastasis-associated lung ademocarcinoma transcript 1，MALAT1）通过抑制miR-204 的表达，促进成骨细胞特异性标志物碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OCN）和矿化的骨基质形成。研究［8］表明：miRNA 参与调节成骨细胞和破骨细胞分化过程。miR-34c 通过调节成骨细胞中特异AT 序列结合蛋白2（special AT-rich sequence binding protein 2，SATB2）和Runt 相关转录因子2（Runx2）等多个靶点，影响成骨细胞和破骨细胞在体内的骨稳态［9］。过表达SATB2可以促进乙醇诱导的骨坏死患者骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchyml stem cells，BMSCs）的成骨分化［10］。目前，LncRNA MALAT1 在ADSCs 成骨分化中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨LncRNA MALAT1 通过miR-34c/SATB2 轴在ADSCs 成骨分化中的作用，以期为明确LncRNA MALAT1 调控ADSCs 成骨分化的机制和骨损伤的治疗提供科学指导。

1 材料与方法

1.1 细胞、主要试剂和仪器原代人ADSCs 购自美国ScienCell 公司，HEK-293T 细胞购自中国典型培养物保藏中心。DMEM培养基购自美国Hyclone公司，胎牛血清（FBS）购自美国Gibco 公司，青链霉素混合液（100×）购自北京索莱宝科技有限公司，Lipofectamine 3000 转染试剂购自美国Invitrogen 公司，SYBRPremix Ex TaqTMⅡ试剂盒购自日本TaKaTa 公司，BCA 蛋白定量试剂盒购自北京全式金公司，lentiviral-pEF-1a/Puro-NC（Lenti-NC）、lentiviral-pEF-1a/Puro-MALAT1（Lenti-MALAT1）、lentiviral-pEF-1a/Puro-SATB2（Lenti-SATB2）、lentiviralpGLVU6/Puro-sh-NC（sh-NC）、lentiviralpGLVU6/Puro-sh-MALAT1（sh-MALAT1）、miR-NC 和miR-34c mimic（miR-34c）均购自……