乔良伟,曲青山,李明

（郑州人民医院器官移植中心肾脏移植科，河南 郑州 450000）

肾移植是治疗终末期肾病（end-stage kidney disease，ESRD）的有效手段，排斥反应是肾移植术后的主要难题和并发症，也是影响移植肾长期存活的主要危险因素，目前临床上最常见的排斥反应类型是急性排斥反应（acute rejection，AR）［1］。近年来，随着免疫抑制剂的出现，肾移植后排斥反应发生率不断下降，但仍时有发生。长链非编码RNA（long non-coding RNA，LncRNA）是一类不具有蛋白编码功能的RNA，广泛参与调节机体的各项基础生物进程，其表达水平异常与多种疾病的发生发展存在密切关联［2］。被转化生长因子β 活化的长链非编码 RNA（long non-coding RNA activated by TGF-β，LncRNA-ATB）是LncRNAs的重要成员，参与细胞增殖、凋亡、转移和侵袭等多种生理过程［3］。既往研究［4］表明：LncRNAATB 在器官移植免疫排斥反应中起调控作用，但在肾移植方面报道较少。本研究通过沉默肾移植模型大鼠LncRNA-ATB 的表达，探讨LncRNA-ATB对肾移植大鼠移植后AR 和受体组织炎症反应的影响，分析肾移植AR 潜在的分子机制，为临床诊断和治疗AR 提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物、主要试剂和仪器供体：雄性SD大鼠30只，SPF级，7～8 周龄，体质量250～300 g；受体：雄性Wistar 大鼠40 只，SPF 级，7～8 周龄，体质量230～300 g；均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物生产许可证号：SCXK（京）2016-0001。所有大鼠术前12h禁食不禁水。含有LncRNA-ATB-短发夹（shRNA）和LncRNA-ATB-NC 的psiCHECK2 基因重组质粒（上海吉玛公司），Opti-MEM 培养基和脂质体 2000（Lipofectamine 2000）（美国Invitrogen公司），白细胞介素6（interleukin6，IL-6）、白细胞介素8（interleukin-8，IL-8）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）ELISA 试剂盒（美国Abcam公司），兔抗大鼠Toll 样受体4（Toll-like receptor-4，TLR4）、髓样细胞分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）和核转录因子 κB（nuclear transcription factor κB，NF-κB）多抗及辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔MyD88 和NF-κB单抗（英国Abcam公司）。……