范培军 王志坚 仲 涛

骨肉瘤是最常见的恶性骨肿瘤，具有恶性程度高、转移容易、预后差等特点[1]，手术与化疗是其主要治疗方法[2]。顺铂(Cisplatin，CDDP)、甲氨喋呤(Methotrexate，MTX)、阿霉素(Doxorubicin，DOX)是临床上应用最多的骨肉瘤化疗药物，但长时间应用后会对正常组织和器官产生严重的毒副作用[3-4]。TNF相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL)是介导细胞凋亡的信号分子，也为一种Ⅱ型跨膜蛋白，可通过与死亡受体的相互作用，从而活化Caspase蛋白酶家族的级联反应，诱导细胞凋亡[5]。当前研究表明TRAIL与化疗药物合用，可提升肿瘤细胞对TRAIL的敏感性[6-7]。本文具体探讨了TRAIL对骨肉瘤细胞U-2OS凋亡与增殖的影响，以明确TRAIL的作用效果与机制。现总结报告如下。

1 材料与方法

1.1 主要研究材料

骨肉瘤U-2OS细胞株购自湖北武汉大学中国典型培养物保藏中心，培养于含15%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基混合液内，采用37 ℃、5% CO2的培养箱进行培养。阿霉素(法玛西亚普强公司)、DMEM培养基(Gibeo公司)、人可溶性TRAIL蛋白(上海广澜生物工程公司)。

1.2 细胞分组与处理

取处于生长对数期细胞状态良好的细胞，随机分为3组，分别为对照组、阿霉素组与联合组，每组(3～5)×105个细胞/ml。对照组进行常规培养，以PBS代替药物处理；阿霉素组采用100 μg/ml的阿霉素处理，联合组在阿霉素组处理的基础上采用1 000 ng/ml的TRAIL处理。

1.3 MTT法检测细胞增殖

把处理后的细胞制成1×104个/ml的细胞悬液，每孔加入20 μl MTT染液，继续培养4 h。小心吸弃孔内培养上清，每孔加150 μl DMSO，震荡15 min，使用酶标仪测定490 nm波长吸光度，计算细胞增殖指数。

1.4 双染法检测细胞凋亡……

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