张睿，孙继芾，陈谦，曹苏成，黄永辉

(1. 江苏大学医学院，江苏 镇江 212013； 2. 江苏大学附属医院脊柱一科，江苏 镇江 212001)

脊髓缺血再灌注损伤(spinal cord ischemia-reperfusion injury,SCIRI) 是指临床上由于脊柱骨折、胸腹主动脉瘤压迫等情况下，脊髓在特定时间段进入相对缺血的状态，医生通过手术解除压迫后，脊髓组织得以恢复灌注，但是其功能并没有恢复，反而在之前的功能障碍上逐渐加重，出现难以逆转的神经功能损害，甚至导致肢体瘫痪等严重后果[1-2]。脊髓神经细胞对缺氧缺血的反应相当敏感，短时间内即可引起明显的脊髓损伤，目前临床上仍没有有效的预防措施[3]。近年来有学者发现，缺血后处理(ischemic post-conditioning,IPC)对SCIRI具有保护效果[4],然而其保护机制尚无定论。钙敏感受体(calcium-sensing receptor，CaSR)在机体多个组织器官广泛表达，参与维持胞内钙离子稳态[5]。发生SCIRI过程中，神经细胞内钙超载是关键环节，而CaSR在其调节中举足轻重[6]。研究证实CaSR在大鼠脊髓神经细胞的胞质内广泛表达，并且在缺血再灌注损伤时表达增加[7]。同时Caspase-12是钙超载诱导内质网应激导致细胞凋亡这条信号通路中的特异性蛋白[8]，因此Caspase-12表达变化能间接反映CaSR变化。本实验通过建立大鼠SCIRI模型，观察IPC对SCIRI的保护作用及IPC后脊髓组织中CaSR和Caspase-12表达的变化。

1 材料与方法

1.1 动物与试剂

清洁级SD大鼠50只，雌性，体重220～250 g，由江苏大学动物实验中心提供，合格证号：NO.201905966，许可证号：SCXK(苏)2018- 0012。β-肌动蛋白抗体、CaSR抗体(兔抗鼠)及Caspase-12抗体(美国CST公司)；羊抗兔二抗(美国Abcam公司)；GdCl3(美国Sigma公司)；NPS2390(美国Tocris公司)；EnVision免疫组化试剂盒(丹麦Dako公司)；TUNEL检测试剂盒(瑞士Roche公司)。……