李岚 李文贵 周清瑶 秦巧莉

（江中药业股份有限公司 江西南昌330004）

蚯蚓纤溶酶（Earthworm Fibrinolytic Enzyme, E FE）又称作蚓激酶（Lumbrokinase,LK），是从赤子爱胜蚓体内提取的一组具有纤溶活性的蛋白水解酶。自1983 年Mihara 等从蚯蚓粗提物中分离到一组具有纤溶酶活性的蛋白质以来，蚓激酶作为溶栓药物已先后在韩国和中国上市，对血栓性疾病有明显的疗效[1]。平板法是目前较为常用的定量方法，用于蚓激酶效价的测定。但在实验操作中，铺板、打孔、点样和计数时出现导致操作误差，并且该检测方法耗时长、效率低，检测使用的蚓激酶标准品、凝血酶和牛纤维蛋白原等试剂成本较高。蚓激酶中的蛋白质在碱性溶液中会与Cu2+鳌合，形成肽-铜复合物，此复合物可使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，该蓝色化合物在650 nm 处的吸光度与蛋白质含量成正比，再以蚓激酶标准品作为对照可计算样品效价。紫外分光光度法的建立正是基于以上原理。现报道如下：

1 仪器与材料

1.1 仪器 MS204-S 电子天平（瑞士梅特勒-特利多公司）；UV2550 紫外分光度计（日本岛津公司）；旋涡震荡器（江苏金坛亿通电子有限公司）。

1.2 试药与试剂 蚓激酶标准品［215 000 U/支，为江中药业股份有限公司自制，批号为201809，使用中国食品药品检定院蚓激酶标准品（编号140650-200502） 进行标定］；蚓激酶干粉（批号18100004-1、18100005-1、18100005-2）、30 万蚓激酶肠溶胶囊（批号18090023、18100024、18100027）和60 万蚓激酶肠溶胶囊（批号18110001、18110002、18110003）为江中药业股份有限公司提供；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 波长的选择[2～3]

2.1.1 标准品溶液的制备 取蚓激酶标准品1 支，用磷酸盐缓冲溶液（pH 值6.8）制备成4 300 U/ml的蚓激酶标准品溶液。……