万笑笑

作者单位：江西省人民医院肾内科，江西 南昌330006

缺血缺氧是导致急性肾损伤的重要原因，在缺血缺氧状态下，机体炎症信号通路被激活，并产生大量炎性因子加剧肾损伤［1-2］。核因子-κB（NF-κB）是细胞内常见的信号通路，与缺血再灌注损伤后引起的炎症反应密切相关［3-5］。miR-216a 是 miR-216家族成员之一，能够广泛地表达于心、肝、脾、肺、肾等组织中，并在胰腺中表达量最高，但在急性胰腺炎中低表达，并与胰腺损伤严重程度有关，因此被作为急性胰腺炎发作时胰腺损伤的潜在标志物［6-8］，但miR-216a在急性肾损伤中表达情况未知，本课题组推测其可能作为急性损伤诊断的标志物。同时miR-216a 能够通过抑制高迁移率族蛋白B1（HMGB1）/NF-κB 信号通路阻断过氧化氢诱导的人支气管上皮细胞氧化应激损伤［9］，进而提示miR-216a 对 NF-κB 信号通路的调控作用。Kruppel样转录因子（Kruppel-like factor，KLF）是一类高度保守的转录因子，有3 个亚族，KLF9 属于亚族3，能够通过促进过氧化物酶体活化受体γ，进而调控糖异生过程，因此KLF9是糖尿病肾病发生的标志物［10］。所以本研究于2018年1—4月通过缺氧-复氧（H/R）复制体外急性肾损伤模型，进而探讨miR-216a在此模型中的表达及相关机制。

1 材料与方法

1.1材料293T细胞（人肾上皮细胞系）、大鼠肾脏近端肾小管上皮细胞系RPTC购于美国典型培养物保藏中心（ATCC）。

胰蛋白酶-乙二胺四乙酸消化液购于Solarbio公司，批号T1300；Lipofectamine® 3000购于invitrogen公司，批号 18882752；OPTI-MEM®I（1×）、MEM NEAA 培养基（100×）购于gibco，批号331985-062、11140-050；DMEM培养基完全高糖培养液购于南京凯基生物技术有限公司，批号KGM12800S-500；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购于上海翊圣生物技术有限公司，批号 D28310；……