何喜，王志强，林韬，胡万宁，张明明

作者单位：唐山市人民医院胸外科，河北 唐山063001

上皮间质转化（epithelial interstitial transformation，EMT）在肿瘤的发生、发展中起到了重要的调节作用，与肿瘤的增殖、迁移和侵袭，复发和预后不良关系密切，也是肿瘤放化疗耐药的重要因素［1］。体内外研究均发现，EMT的发生多提示食管癌预后不良，促进肿瘤进展，使食管癌细胞迁移和侵袭能力增加［2-3］。研究表明，血清应答因子（serum response factor，SRF）在肿瘤中的高表达与EMT关系密切，其作为转录因子能够下调E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达［4］，同时亦能够调节下游靶蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达并促进EMT 的形成［5］。本课题组前期研究也发现，SRF 在食管癌组织中的异常高表达，采用基因沉默方法降低SRF的表达，则能够有效的在体外抑制食管癌细胞的增殖［6］。因此本研究于2019年1—12月拟采用转化生长因子β1（transforming growth factorβ1，TGF-β1）在体外诱导Eca-109 食管癌细胞发生EMT，并观察基因沉默SRF 对其的干预效应，为开发食管癌新的基因治疗提供初步的实验依据。

1 材料与方法

1.1主要试剂Eca-109食管癌细胞购置于中科院上海细胞库；DMEM 培养基、胎牛血清购置于美国GIBIO 公司；TGF-β1 购置于美国 peprotech 公司；SRF、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、GAPDH购置于美国santa cruz 公司；α-SMA 购置于英国abcam 公司；小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）产品购置于广州锐博生物科技有限公司。

1.2方法

1.2.1 细胞培养及转染 Eca-109 细胞用含体积分数为10%胎牛血清的1640 培养基，置于37 ℃，5%二氧化碳孵育箱中培养。待细胞次融合状态后，实验分组为：（1）阴性对照siRNA 组：阴性对照siRNA转染6 h，更换无血清培养基24 h；（2）TGF-β1+阴性对照siRNA 组：阴性对照siRNA 转染6 h，更换含5 ng/mL TGF-β1 诱导 24 h；（3）TGF-β1+SRF-siRNA组：SRF-siRNA 转染6 h 后，更换含5 ng/mL TGF-β1诱导+SRF-siRNA。……