张威，王帅，王喜梅，张帆

作者单位：洛阳东方医院消化科，河南 洛阳471003

肝缺血再灌注（Ischemia reperfusion，IR）损伤是一个复杂的病理生理过程，由缺氧引起的细胞损伤，随后是血流量和供氧量的恢复，从而导致细胞损伤［1］。IR损伤是肝移植、肝切除、失血性休克和肝衰竭等常见的临床并发症［2］。在肝移植病例中，IR损伤的发生引起10%病人早期移植失败，在急性和长期的排斥反应中发生率更高［3］。在肝IR 损伤过程中，缺血损伤不仅直接造成细胞损伤，还会引起急性炎症反应，进而加重肝细胞损伤、器官功能障碍和衰竭。目前，IR 损伤的机制尚不清楚，临床仍然缺乏有效的预防策略，因此，迫切需要开发新的治疗方法。葛根素主要提取自豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的干燥根。既往研究表明，葛根素（Puerarin）或葛根素注射液在肝IR损伤中表现出良好的治疗效果［4-6］，但其分子机制并未完全阐明。因此，本研究于2018年4月至2019年2月建立小鼠肝细胞缺氧-复氧（Hypoxia and reoxygenation，H-R）损伤模型来模拟IR 损伤，考察葛根素对H-R 损伤的小鼠肝细胞增殖和凋亡的影响，结合miR-7 和核因子-κB（Nuclear factor-κB，NF-κB）信号通路进一步探索葛根素的作用机制，为葛根素在IR损伤中的应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1试剂及仪器小鼠肝细胞购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，DMEM 培养基、胎牛血清购于美国Gibco 公司，葛根素购于上海阿拉丁生化公司，miRNA 提取试剂盒购于上海Qiagen公司，胰酶、RIPA裂解液、3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）、佛波酯（PMA）购于美国Sigma公司，膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）细胞凋……