王 萍，王新芳，李海龙，霍韶瑜，姜国均，郝 丹，崔荣飞

（1.河北省兽药监察所 050000；2.河北省畜牧总站 050000；3.河北农业大学动物医学院 071001；4.河北省畜牧兽医学会 050000；5.石家庄市畜产品质量监测中心 050000）

自上世纪人们发现抗生素对畜禽生长具有促进作用以来，便被用来作为饲料添加剂， 这期间对动物生长和预防疾病起到了非常好的效果，但随着抗生素的长期广泛应用，它的弊端也越来越明显，例如引发动物肠道菌群失调、机体产生耐药性、抗病力降低和药物残留等问题。2018 年，农业农村部决定开展兽用抗菌药使用减量化行动，组织制定了《兽用抗菌药使用减量化行动试点工作方案（2018 年-2021 年）》，确定了各地兽用抗菌药使用减量化行动试点养殖场数量。 2017 年农业部，关于发布《药物饲料添加剂品种目录及使用规范》的公告，明确指出禁止抗病促生长的抗生素在饲料中长期添加，本研究受传统中药“焦三仙”启发，通过研究筛选出几种添加剂，探寻促进仔猪生长和提高免疫力的最佳组方，来替代传统抗生素添加剂，以满足当下养殖业需求，不论是对饲料资源的合理有效利用、饲料基本成本的降低，还是对保证食品动物最佳的生产性能， 都具有十分重要的理论与现实意义。

1 材料与方法

1.1 试验动物

试验仔猪150 头，品种为杜×长×大 三元猪，由河北省高阳某养殖场提供。

1.2 试验材料

“新肠泰” 购自四川达邦生物技术有限公司；酸化剂、乳猪酶、枯草芽孢、酵母、果寡糖购自石家庄牧丰饲料原料贸易有限公司；山楂、麦芽、神曲，购自保定东方中药有限公司；IL-2；IL-10；IFN-γ；TNF-α 细胞因子和猪瘟抗体检测试剂盒购自上海通蔚生物科技有限公司； 猪瘟抗体疫苗购自中牧实业股份有限公司，饲料购自大北农饲料有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 试验分组及处理

150 头平均日龄为21d，平均体重为(6.98±0.45)kg 的杜长大三元杂交断奶仔猪， 按体重、 性别和胎次基本一致原则分为A、B、C、D 和E 组，每组10 头，设3 个重复，饲养7d 适应期后，试验组（A 组、B 组、C 组、D 组）于平均28 日龄开始，依次按0.1%拌料添加新三仙Ⅰ、新三仙Ⅱ、新三仙Ⅲ、焦三仙；空白对照组（E 组）不添加任何药物（分组及处理详见表1）。

表1 各添加剂的主要成分

试验猪于哺乳期（14d）进行公猪去势，平均日龄21d 时断奶，28 日龄对猪群用猪瘟疫苗常规免疫。并分别于开始与实验结束时对各组猪只重，计算料重比；并在免疫前（28 日龄）、免后2周（42 日龄）、4 周（56 日龄）、6 周（70 日龄）各组随机选取6 头前腔静脉采血2mL，提取血清，-20℃保存。

1.3.2 仔猪生长性能的测定

试验全程以栏为单位记录采食量， 分别于试验开始前（28日龄）和结束时（70 日龄）当天对空腹断奶仔猪称重，计算每头断奶仔猪的平均日增重(Average daily gain ，ADG)、 平均日采食量(Average daily intake ，ADFI)和料重比（Material weight ratio，F/G)，具体计算方法如下：

平均日增重（ADG)=栏总增重/(栏仔猪数x 试验天数）；

平均日采食量(ADFI)=栏饲粮总消耗量/(栏仔猪数x 试验天数）；

料重比(F/G)=ADFI/ADG。

1.3.3 猪瘟抗体效价的测定

采用ELISA 检测试剂盒，按说明测定血清中猪瘟抗体的含量。

1.3.4 仔猪血清中免疫细胞因子含量的测定

采用ELISA 检测试剂盒， 按说明测定血清中IL-2（Interleukin -2）、IL-10（Interleukin -10）、TNF-α（Tumor necrosis factor-α）和IFN-γ(Interferon -γ)的含量。

1.4 数据分析

采用SPSS19.0 软件对数据进行统计和分析。

2 试验结果

2.1 仔猪生长性能的测定结果

表2 不同组方对仔猪生长性能的影响

结果详见表2。 试验仔猪的末重和平均日增重，A 组和C 组高于其他各组，B 组和D 组高于E 组，差异极显著(P＜0.01)；试验仔猪的料重比，C 组低于其他各组，A 组、B 组和D 组低于E 组，差异显著(P＜0.05)。 试验表明，日粮中添加新三仙和焦三仙能显著促进仔猪的生长发育和提高饲料利用率。

2.2 仔猪猪瘟抗体效价的测定结果

表3 不同组方对仔猪猪瘟抗体效价的影响

结果详见表3。 28 日龄，各组仔猪的猪瘟抗体效价相近，差异不显著（P＞0.05）； 42 日龄，试验各组仔猪的猪瘟抗体效价高于对照组，B 组和C 组的猪瘟抗体效价高于其他各组，差异显著（P＜0.05）；56 日龄和70 日龄， 试验各组的猪瘟抗体效价高于对照组，B 组和C 组的猪瘟抗体效价高于其他各组， 差异极显著（P＜0.01）。 结果表明，给仔猪拌料使用自配的添加剂具有增强仔猪猪瘟疫苗功免疫效果的作用， 其中添加黄芪多糖的B 组和C组效果尤其显著。

2.3 仔猪血液中免疫细胞因子的测定结果

2.3.1 血清中IL-2 含量的测定结果

表4 不同组方对仔猪血清中IL-2 含量的影响（pg/mL）

结果详见表4。 由表可见42 日龄时C 组高于其他各组，差异显著（P＜0.05）。 56 日龄和70 日龄B 组、C 组IL-2 含量高于其他各组，差异显著（P＜0.05）。 试验结果表明，B 组、C 组具有显著提高血清中IL-2 含量的作用，这可能与B 组和C 组中添加黄芪多糖有关。

2.3.2 血清中IL-10 含量的测定结果

表5 不同组方对断奶仔猪血清中IL-10 含量的影响（pg/mL）

结果详见表5。 28 日龄时各组间差异不显著，42 日龄时B组、C 组血液中IL-10 的含量显著高于其他各组， 差异显著 （P＜0.05）；56 日龄与70 日龄的结果显示C 组血液中IL-10 的含量显著高于B 组，差异显著（P＜0.05）；B 组高于其他各组，差异显著（P＜0.05）。试验结果表明，新三仙Ⅱ组、新三仙Ⅲ组可显著提高仔猪血清中IL-10 含量，其中新三仙Ⅲ组的效果最为显著。

2.3.3 血清中IFN-γ 含量的测定结果

表6 不同组方对仔猪血清中IFN-γ 含量的影响（pg/mL）

结果详见表6。28 日龄时各组间差异不显著（P＞0.05），饲喂两周以后即42 日龄、56 日龄、70 日龄时B 组、C 组血清中IFN-γ含量始终高于其他各组，差异显著（P＜0.05），且C 组高于B 组，差异不显著（P＞0.05）。A 组、D 组、E 组差异不显著（P＞0.05）。试验表明， B 组、C 组都能显著提高血清中IFN-γ 含量的作用， 且新三仙Ⅲ组效果最好。

2.3.4 血清中TNF-α 含量的测定结果

表7 不同组方对仔猪血清中TNF-α 含量的影响（pg/mL）

结果详见表7。 28 日龄时实验组与对照组差异不显著（P＞0.05），42 日龄时C 组血清中TNF-α 含量高于其他各组，差异显著（P＜0.05），56 日龄与70 日龄时B 组、C 组血清中TNF-α 含量高于其他各组，差异显著（P＜0.05），B 组血清中TNF-α 含量高于C 组，差异不显著（P＞0.05）。 试验结果表明，新三仙Ⅱ组、新三仙Ⅲ组对断奶仔猪血清中TNF-α 的含量有明显的提升作用，其他组的影响不明显。

3 讨论

3.1 新三仙对断奶仔猪生产性能的影响

“新三仙”根据“焦三仙”组方原理结合仔猪消化特点，采用包被益生菌“新肠泰”、酶制剂、酸化剂等组合而成。 此次试验结果表明， 日粮中添加新三仙和焦三仙能显著促进仔猪的生长发育和提高饲料利用率，显著降低仔猪的腹泻发生率，这可能与添加的“新肠泰”、寡糖、酶制剂、酸化剂、黄芪多糖等有关。 饲料中的营养物质， 大约70%～80%在小肠段消化吸收，20%～30%进入大肠，其中大部分排出体外，形成粪便和氨气等排泄物。 本试验通过在饲料中添加“新三仙”挖掘利用大肠中20%～30%的营养物质，提高饲料消化率， 提高仔猪生产性能。

肠道中的益生菌可以产生有机酸和抑菌成分， 抑制病原菌的生长，优化肠道微生态区系，促进营养物质消化和吸收，达到促进动物生长的目的。 猪大肠主要进行微生物消化，以进入大肠的未消化饲料、脱落的肠黏膜和胃肠道消化酶为底物，经过大肠消化相关的微生物发酵产生以挥发性脂肪酸为主的产物， 大部分产物被动物吸收利用，为动物生长提供能量。 “新三仙”中包被的乳酸粪肠球菌，能耐高温、耐胃酸，能顺利地在大肠中定植、快速繁殖，维持肠道微生态平衡，促进营养物质的消化吸收，促进肠道蠕动，使动物消化道处于最佳健康状态，提高饲料消化率。前人的研究充分证实益生菌可以通过调节构建大肠高效微生态系统，促进营养物质在大肠段的消化和吸收，提高饲料利用率，显著降低料肉比。 史自涛等[1]试验发现饲料中添加粪肠球菌可提高平均日增重和平均日采食量，降低仔猪腹泻率，提高仔猪的生产性能。 李兴华[2]研究发现，在饲料中添加酵母细胞壁多糖和枯草芽孢杆菌， 能显著提高哺乳和断奶仔猪免疫功能和肠道消化酶活性， 二者合用更能显著促进仔猪生长发育和提高其免疫功能。 彭小兰[3]、马秋刚[4]等研究发现饲料中添加果寡糖能提高断奶仔猪的饲料转化率和日增重，降低仔猪腹泻率，其效果与添加量关系密切。 王向荣等[5]研究发现四种不同的复合酶制剂均能提高仔猪的日增重，降低料重比，降低仔猪腹泻率；贺琴[6]试验表明添加酶制剂可以补充仔猪机体內源酶，促进仔猪健康生长。 酸化剂是仔猪常用的另一类添加剂，它可以降低仔猪胃酸pH 值，提高仔猪消化力。 岳增华等［7］在仔猪日粮中添加1.2%的柠檬酸或者0.5%复合酸化剂，发现都能显著提高仔猪的日增重。

3.2 新三仙对断奶仔猪猪瘟抗体效价的影响

猪瘟抗体效价的高低， 直接决定了仔猪对猪瘟病毒的抵抗力。 此次试验结果发现，42 日龄，试验各组仔猪的猪瘟抗体效价高于对照组，B 组和C 组的猪瘟抗体效价高于其他各组，差异显著（P＜0.05）；56 日龄和70 日龄，试验各组的猪瘟抗体效价高于对照组，B 组和C 组的猪瘟抗体效价高于其他各组，差异极显著（P＜0.01）。试验结果表明饲料中添加新三仙和焦三仙均对猪瘟疫苗产生抗体有一定的辅助作用，其中，“新三仙Ⅱ”和“新三仙Ⅲ”产生的抗体又高于其他各组，因此“新三仙Ⅱ”、“新三仙Ⅲ”对断奶仔猪增强猪瘟疫苗抗体效果最好， 这可能与其添加黄芪多糖和果寡糖等有关。 朱辉［8］和许静波等［9］研究表明，在仔猪饲料中添加黄芪多糖能显著提高仔猪猪瘟疫苗免疫的抗体含量， 且猪瘟抗体水平随黄芪多糖应用剂量的增加而呈上升趋势； 岳文斌等［10］试验发现果寡糖能增强机体的体液免疫和细胞免疫功能；韩庆功等［11］研究发现，日粮中添加复合酸化剂与抗生素组相比，猪瘟疫苗抗体水平提高了21.6%。

3.3 新三仙对断奶仔猪血液中免疫细胞因子的影响

白细胞介素是作用于白细胞和免疫细胞之间的淋巴因子，它具有免疫调节功能。IL-2 是由活化的T 淋巴细胞产生，能激活T 细胞和促进B 细胞分化和分泌抗体， 诱导产生干扰素。 IL-10主要由Th2 细胞、巨噬细胞、活化的B 细胞和单核细胞产生，它参与免疫细胞、炎症细胞、肿瘤细胞等多种细胞的生物调节，在严重感染性疾病、 自身免疫性疾病和肿瘤等多种疾病中发挥重要作用。 试验结果表明，“新三仙Ⅱ”、“新三仙Ⅲ”可显著提高仔猪血清中IL-2 和IL-10 含量，其中新三仙Ⅲ的效果最为显著，这可能与B 组和C 组中添加黄芪多糖有关。 金虹等[12]试验表明经小鼠服用黄芪多糖，能提高脾虚小鼠IL-2 的活性，提高其腹腔巨噬细胞的吞噬功能；罗燕等[13]研究表明黄芪多糖可提高血清中IL-2 的含量；李彦东等[14]研究表明黄芪多糖主要通过调节免疫因子或免疫细胞等作用而发挥调节动物机体的免疫功能； 唐志如等[15]研究发现，日粮中添加壳寡糖和半乳甘露寡糖均能显著提高早期血清中IgG、IgA、IgM、IL-2 和Il-6 免疫因子的浓度。

γ-干扰素是水溶性二聚体细胞因子，Younger 和Salvin 在1973 年发现淋巴细胞培养上清中存在一种IFN，1980 年命名为γ 干扰素。γ-干扰素具有免疫调节、抗病毒及抗肿瘤特性，它是通过增强T 淋巴细胞、巨噬细胞和NK 细胞的活力来调节机体的免疫力。 TNF-α 肿瘤坏死因子-α 又称为恶病质素，是由细菌脂多糖活化的单核细胞、巨噬细胞和T 细胞产生，能够引起肿瘤细胞出血坏死而得名；TNF-α 在细胞因子免疫调节网络中处于中枢环节，是机体炎症反应以及免疫反应的重要调节因子。 在病理状态下的机体中，TNF-α 能够清除受损细胞，从而维持机体内环境的平衡。 因此，TNF-α 在维持机体内部稳定、抵御各种病原、细菌侵袭的过程中必不可少，可以保护机体，若TNF-α 过度合成，机体将会失去平衡，造成组织损伤。 此次试验发现，42、56、70 日龄时B 组、C 组血清中IFN-γ 含量始终高于其他各组， 差异显著（P＜0.05）；42 日龄时C 组血清中TNF-α 含量高于其他各组，56、70 日龄时B 组、C 组血清中TNF-α 含量高于其他各组， 差异显著（P＜0.05）。

综合IL-2、IL-10、IFN-γ 和TNF-α 检测的结果来看，“新三仙Ⅱ”、“新三仙Ⅲ” 与其他组相比有显著提升免疫机能的效果，应该与其含有黄芪多糖有关， 黄芪多糖在免疫后各试验阶段对能反映机体免疫功能的细胞因子IL-2、IL-10、IFN-γ、TNF-α 都有增强的作用，这与马霞等[16]的研究成果是一致的。

4 结论

“新三仙”能显著提高断奶仔猪的日增重，降低料重比，增强仔猪的免疫功能，其中“新三仙Ⅲ”效果最好。