张艳

（辽宁省开原市中医医院 辽宁铁岭 112300）

1 前言

氨曲南对需氧革兰阴性菌有极强的灭菌效果，但对革兰阳性菌的灭菌效果极差，所以，氨曲南属于抗菌谱较窄的特殊类抗生素药物。本文对药物及生物样品中的氨曲南水平进行检测，通过规范对氨曲南的使用，为患者的用药安全提供保障[1]。现阶段，用于检测氨曲南的方法复杂多样，可分为原子吸收法、液质联用法、紫外可见分光光度法，以上方法在检测氨曲南的实际应用中均有不足之处[2]。本文建立了罗丹明B和氨曲南的荧光分析法，在实际应用中取得了较好的试验效果。

2 仪器与试剂

仪器：精密酸度计（上海雷磁pHS-3C）；荧光分光光度计（日立F-7000）。

试剂：氨曲南（质量分数96.7%）；尿液；市面出售的无片剂型氨曲南药物；

氨曲南试液：称取适量氨曲南对照品，在样品中滴入甲醇试剂促进对照品溶解，取100 nL的容量瓶对样品定容，放置于4℃的环境下保存，对成品进行质量浓度分析，得到42.98 mg/L浓度的试液；罗丹明B：取样浓度为1.00×10-4mol/L，质量分数为99%（成都贝斯特试剂有限公司）；三羟甲基氨基甲烷（Tris）：取样浓度为0.20mol/L；盐酸试剂：取样浓度0.10mol/L；将盐酸试剂和Tris摇匀混合后，得到pH为3.0～9.5的成品溶液；超纯水[3]。

3 试验流程

3.1 样品的准备

随机从药品市场购买不同规格的注射用氨曲南，将其标记为1#和2#。取不同的试剂瓶盛放样品，滴加甲醇，充分溶解氨曲南，转移试液于1 000 mL容量瓶中，使用超纯水定容，用胶头滴管分别量取10 mL 1#溶液和5 mL 2#溶液，定容至100 mL，标记为1#待测溶液和2#待测溶液。

3.2 操作方法

用胶头滴管吸取2mL罗丹明B溶液转移至10mL具塞比色管中，滴入pH为6.55的盐酸-Tris混合溶液，滴加适量标准溶液后，对其定容，用力摇匀，充分混合后，于（20±2）℃的环境下静置 15 min，在激发波长/发射波长=556 nm/583 nm下使用荧光分度计，测量空白试剂、体系和样品的荧光度F和标准荧光度F0的数值[4]。

4 结果和数据讨论

4.1 罗丹明-B-氨曲南光谱分析

对比罗丹明B-氨曲南的激发光谱和发射光谱，对结果进行分析可知，激发峰和发射峰的最大值和稳定趋势在λex=556nm和λem=583nm处，详见图1、图2[5]。

图1 罗丹明B-氨曲南激发与发射光谱分析图

图2 罗丹明B-氨曲南发射光谱分析图

4.2 试剂调放顺序

氨曲南、罗丹明B、盐酸-Tris具有固定的调放顺序，大量数据表明，罗丹明B→盐酸-Tris→氨曲南为最佳调放顺序。按照此顺序进行试剂调放可以保障整个检测体系的灵敏度和荧光淬灭效果[6]。

4.3 溶液酸度和用量关系

改变盐酸-Tris的pH，体系内荧光淬灭程度变化幅度较大，灵敏度较高，故选用pH=6.55 Tris－盐酸溶液3.00 mL控制反应酸度。

4.4 梯度回收试验分析

吸取1#和2#待测液各1.00 nL，按照上述试验方法加入罗丹明B溶液和缓冲溶液，选择参数条件仪器对样品进行荧光强度和含量测定。对2种待测溶液的梯度回收试验进行分析，详见表1。

表1 氨曲南样品中回收试验和分析结果（n=5）

4.5 最终结果分析

本次研究构建了氨曲南荧光反应新型检测方法，对整个体系中氨曲南的含量测定进行检测，氨曲南加标回收率为97.6%～102%，1#待测溶液和2#待测溶液的相关标准偏差经计算为1.9%～2.7%，以上数据经过专业数据处理软件以及专业人士计算得出。

5 结语

本文通过对药物中的氨曲南的荧光反应进行反复试验，得出荧光反应中的最佳参数，对试验数据的调放以及溶液酸度和用量关系等影响检测试验的因素进行分析，对结果中的回收率和相对标准差进行计算。结果显示，该方法灵敏度高，测验结果可靠，可用于药品中氨曲南的测定。