黄元河，潘乔丹，赵秋华，张忠伟，黄玉镯，农礼翔

1.右江民族医学院基础医学院（百色 533000）；2.右江民族医学院药学院（百色 533000）

壮族是我国第二大民族，据考古文献记载壮族起源旧石器的左右流域[1]。壮族从旧时器时代发展到今，历尽不同时代文化的渗透和融合，在与自然的相处过程中，形成长期食用野生植物的习惯，一直言传至今，形成具有地方特色民族植物文化。此次试验选取右江区壮族居民长期食用的5种野生野菜作为研究对象。狗肝菜[Dicliptera chinensis（L.）Juss.]为爵床科多生草本植物，地上部分作为蔬菜食用，具有清热解毒、生津利尿的功效[2]；含有挥发油类化合物、萜类化合物、苯丙素类化合物、甾体及其苷类等成分，具有保肝活性、免疫调节功能和抗氧化活性[3]。铜锤玉带草（Lobelia angulata Forst）为桔梗科多年生草本，地上部分作为蔬菜食用，别名钮子菜，具有清热毒、除湿毒的功效，含有聚乙炔、黄酮类化合物、脂肪酸、多萜类化合物等成分，具有抗炎镇痛作用、保肝作用[4]。鸭儿芹（Cryptotaenia japonica Hassk）为伞形科多年草本，全株作为蔬菜食用，具有消炎、解毒、活血消肿的功效，主治肺炎、肺脓肿、淋病、感冒咳嗽、跌打损伤，外用治皮肤瘙痒等病症[5]。五指牛奶（Ficus simplicissima Lour.）为桑科小灌木，根可煲汤，具有健脾化湿、补气化痰、行气舒筋的功效，含有补骨脂素、异补骨脂内酯、佛手柑内酯、伞形花内酯、山柰酚、木犀草素、β-谷甾醇、豆甾醇等，用于治疗主治慢性支气管炎、支气管哮喘、肺痨咳嗽、肝炎、肝硬化、风湿痹痛、脾虚食少等[6]。野芋（Colocasia gigantea（Blume）Hook. f）为天南星科多年生大型草本，叶柄作为蔬菜食用，具有解毒、消肿止痛、祛痰镇痉的功效，家种无毒、野生有毒[7]。为了更好地开发右江流域药食同源植物，此次试验对这5种野生蔬菜的可食部分进行氨基酸种类及含量分析，并对它们的营养价值进行评价。

1 材料与方法

1.1 试验材料

5种野菜为狗肝菜、鸭儿芹、野芋的叶柄，以及铜锤玉带草和五指牛奶的根。其中，狗肝菜、鸭儿芹、野芋叶柄均于6月份购自广西百色市右江区东风菜市场，铜锤玉带草和五指牛奶根于6月份采挖于广西百色市右江区岗乐山，经过右江民族医学院黄元河老师鉴定确认。将样品洗净，干燥，粉碎，干燥储存备用。每份样品充分测定3次，取平均值。

1.1.1 游离氨基酸待测溶液

取1.0 g样品粉末，精密称定，加入100 mL 50%的乙醇溶液，超声（300 W，100 kHz）提取2次，每次30 min，抽滤去渣取液，合并滤液，旋转蒸发器中（80 ℃，50 r/min）挥至近干，用超纯水定容至10.0 mL，即得样品游离氨基酸测试溶液。

1.1.2 水解氨基酸测试溶液

取1.0 g样品粉末，加入10 mL 6 mol/L盐酸和1 mL 1%苯酚，抽真空充氮气，重复3次，在110 ℃烘箱中水解24 h，过滤得水解液，于80 ℃水浴挥干，用3 mol/L氢氧化钠溶液调节pH近中性，超纯水定容至50 mL，即得样品水解氨基酸测试溶液。

1.2 主要仪器、设备与试剂

1.2.1 仪器与设备

岛津LC-20A高效液相色谱仪：岛津企业管理（中国）有限公司；SHB-III循环水式多用真空泵（天津市予华仪器有限公司）；TGL-15B高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；RE-3000旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；Mill-Q超纯水机（美国密理博）。

1.2.2 试剂18种氨基酸标准品（色谱级，上海源叶生物有限公司）；三乙胺、异硫氰酸苯酯、乙腈（色谱级，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；冰乙酸、无水乙酸钠、浓盐酸（分析纯，西陇化工股份有限公司）；超纯水（自制）。

1.3 测定方法

参考陈蓉等[8]柱前衍生-HPLC法，测定氨基酸。

1.3.1 衍生测定液制备

分别精密移取400 μL混合对照标准品溶液、样品游离氨基酸和水解氨基酸溶液置于EP管中，加入1 mol/L的衍生试剂A（1 mol/L三乙胺乙腈200 μL）、0.1 mol/L衍生试剂B（0.1 mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液）各200 μL，混匀，室温避光放置1 h，加入800 μL正己烷，涡旋振荡5 min，放置10 min，以12 000 r/min离心5 min，取下层溶液，制得衍生化溶液。溶液经0.22 μm滤膜滤过，超声5 min，进样20 μL。

1.3.2 色谱条件

Shim-pack VP-ODS色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱温40 ℃，流速1.0 mL/min，检测波长254 nm，单次进样品20 μL。采用梯度洗脱：0 min，0%B；11 min，7.0% B；13.9 min，12.0% B；14 min，15.0% B；29 min，34.0% B；32 min，50.0% B；37 min，100% B；50 min，0% B。流动相A为0.1%醋酸钠缓冲溶液（pH 6.5）-乙腈（93∶7，V/V），流动相B为乙腈-水（4∶1，V/V）并进行精密度试验、重复性试验、稳定性试验、线性关系考察，结果均达到要求，线性方程见表1。由表1可见，在线性范围内，各种氨基酸的进样量浓度（x）与峰面积（y）的对数的线性方程的R2均大于0.999 0，线性关系良好。各氨基酸出峰明显，无拖尾现象，便于区分。

表1 18种氨基酸的线性回归方程及相关系

2 结果与分析

2.1 游离氨基酸的含量

游离氨基酸是指以单个氨基酸分子在植物体内以游离态存在，可被直接吸收利用的氨基酸。依照1.1小节制备5种野生蔬菜游离氨基酸待测液，然后按照1.3小节进行衍生化处理进样，测定18种氨基酸峰面积，通过加样品回收试验和线性方程计算18种游离氨基酸含量，结果见表2。

根据氨基酸的用途，氨基酸可以分为人体必需氨基酸、甜味氨基酸、苦味氨基、鲜味氨基酸和药效氨基酸[8]。从表2可以看出：5种野菜中狗肝菜、铜锤玉带草中均检测出18种游离氨基酸；鸭儿芹中未能检出谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、甘氨酸，五指牛奶根中未能检出丝氨酸、甘氨酸、甘氨酸，野芋叶柄中色氨酸未能检出；除了野芋叶柄中未能检出必需氨基酸色氨酸，其他4种野菜中均有8种人体需氨基酸；其中狗肝菜中天冬氨酸（鲜味氨基酸）和谷氨酸（鲜味、甜味氨基酸）含量较高，铜锤玉带草中天冬氨酸（鲜味氨基酸）、丝氨酸（甜味氨基酸）、苏氨酸（甜味氨基酸）、组氨酸（药效氨基酸）含量较高；鸭儿芹中苏氨酸（甜味氨基酸）、脯氨酸（甜味、苦味氨基酸）、酪氨酸（药效氨基酸）含量较高。

表2 5种野菜18种游离氨基酸的含量（以干质量计）mg/g

2.2 水解氨基酸的含量

水解氨基酸是通过酸解，将待测植物体内的蛋白质、多肽等氨基酸链水解成单个氨基酸，因此水解氨基酸能够全面反映样品中所有单个氨基酸种类和含量。依照1.1小节制备5种野生蔬菜水解氨基酸待测液，然后按照1.3小节进行衍生化处理进样，测定18种氨基酸峰面积，通过加样品回收试验和线性方程计算18种水解氨基酸含量，结果见表3。各种必需氨基酸占总氨基酸的质量分数及WHO/FAO推荐的模式谱标准值见表4。

从表3可以看出：5种野菜中均检测出18种水解氨基酸，其中狗肝菜、鸭儿芹、铜锤玉带草三种菜叶类野菜的总氨基酸含量均较高，分别为33.07，44.03和51.31 mg/g；而根茎类野菜五指牛奶根、野芋叶柄的总氨基酸含量较低。铜锤玉带草中的天冬氨酸（鲜味氨基酸）和谷氨酸（鲜味、甜味氨基酸）含量最高，分别为8.43和13.61 mg/g，是口感很好的野生蔬菜；5种野生蔬菜均含有8种人体必需氨基酸，含量从高到低依次为鸭儿芹、狗肝菜、铜锤玉带草，而五指牛奶根和野芋叶柄含量较低。5种野菜药效氨基酸含量均较高，这些说明其有着较好的营养价值和药用价值。

表3 5种野菜18种水解离氨基酸的含量（以干质量计） mg/g

从表4可以看出：5种野菜中必需氨基酸相对含量与WHO/FAO推荐的人体必需氨基酸含量模式谱[9]相比，狗肝菜中甲硫氨酸-半胱氨酸、赖氨酸低于标准模式外，其余氨基酸高于标准模式；鸭儿芹和野芋叶柄中甲硫氨酸-半胱氨酸低于标准模式外，其余氨基酸高于标准模式；铜锤玉带草中甲硫氨酸-半胱氨酸含量明显低于标准模式外，其余必需氨基酸比例均高于或接近标准模式；五指牛奶根中赖氨酸和色氨酸明显高于标准模式，其余氨基酸低于标准模式。这说明5种野菜中狗肝菜、鸭儿芹、铜锤玉带草和野芋叶柄必需氨基酸含量配比较为合理，属于较优质的蛋白质来源。

表4 5种野菜中各种人体必需氨基酸占总氨基酸总量的质量分数

3 结论与讨论

此次试验选用异硫氰酸苯酯作为柱前衍生试剂，因其与一二级氨基酸可同时反应，形成的衍生产物（苯氨基硫甲酰衍生物）单一、稳定，衍生副产物对测定无干扰[10]，因此柱前衍生RP-HPLC法具有简便、快捷、高效，具有较高的稳定性特点[11]。此次试验采用该方法检测右江流域壮族食用5种野生蔬菜的游离氨基酸和水解氨基酸含量。游离氨基酸检测显示狗肝菜、铜锤玉带草均含有18种游离氨基酸，狗肝菜、铜锤玉带草、鸭儿芹鲜味和甜味氨酸含量较高，是味道较好的野生蔬菜。水解氨基酸检测显示，鸭儿芹各种氨基酸含量与孙晓慧等[12]测定结果不一致、五指牛奶根中各种氨基酸含量与曹利民等[13]测定结果不一致，这可能与材料的产地、气候、季节有关。狗肝菜、鸭儿芹、铜锤玉带草三种菜叶类野菜的总氨基酸含量均较高，铜锤玉带草中的天冬氨酸和谷氨酸含量最高。谷氨酸能够促进大脑红细胞生成、改进大脑机能，与血氨形成谷酰氨，能够解除氨毒害作用。天门冬氨酸在冠状供血不足引起心肌缺氧时，对心肌有保护作用；还参与鸟氨酸循环，降低血压中氮和二氧化碳的含量，增强肝功能等[14]。5种野生蔬菜均具有8种人体必需氨基酸，鸭儿芹、狗肝菜、铜锤玉带草含量较高，药效氨基酸丰富。狗肝菜、鸭儿芹、铜锤玉带草和野芋叶柄必需氨基酸含量配比与WHO/FAO推荐标准模式相比，必需氨基酸含量配比较为合理，属于较优质的蛋白质来源。因此通过从营养角度还是药膳保健方面考虑，狗肝菜肝菜、鸭儿芹、铜锤玉带草均具有较好的开发前景。