赵乙桦 钟江斌 李威霖 祁得胜 孙士浩 邹登朗 都玉蓉 马建滨

摘要：为研究宽叶独行菜（Lepidium latifolium L.）提取物对胃肠动力障碍大鼠的影响，并初步探讨其作用机制，选取24只SPF级SD大鼠，体重180～200g，随机分成空白组、模型组和受试药物组，每组8只，雌雄各半，各组大鼠灌胃给予相应的药物，受试药物组每只大鼠灌胃2mL宽叶独行菜提取物溶液（0.36g/mL），空白组和模型组每只大鼠灌胃等体积去离子水。每天1次，连续灌胃6d后禁食不禁水24h，第7天正常给药lh后，模型组和受试药物组大鼠腹腔注射硫酸阿托品2mg/kg，空白组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水。20min后，所有大鼠均灌胃0.4mL 2%蓝色凭聚糖-2000溶液30min后腹腔注射4mL/kg的10%水合氯醛溶液麻醉大鼠，取材测定胃排空率和小肠推进率，ELISA法测定胃和十二指肠匀浆中P物质（SP）和饥饿素（Ghrelin）浓度。结果表明，与空白组比较，模型组大鼠胃排空率和小肠推进率极显著降低（P<0.01），胃、十二指肠中SP浓度和胃中Ghrelin浓度无明显变化（P>0.05），十二指肠中Ghrelin浓度极显著降低（P<0.01）。与模型组比较，受试药物组大鼠胃排空率和小肠推进率均极显著升高（P<0.01），胃中SP浓度显著升高（P<0.05）;胃中Ghrelin浓度和十二指肠中SP、Ghrelin浓度均极显著升高（P<0.01）。表明宽叶独行菜提取物能改善硫酸阿托品致胃肠动力障碍大鼠的胃肠动力，提高其胃和十二指肠中SP和Ghrelin浓度可能是其发挥促胃肠动力作用的机制之一。

关键词：宽叶独行菜（Lepidium latifolium L.）;大鼠胃肠动力;P物质（SP）;饥饿素（Ghrelin）

中图分类号：S567.23+9;R915 文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2020）09-0130-03

DOI：10.14088/i.cnki.issn0439-8114.2020.09.027

宽叶独行菜（Lepidaum latifolium L.）系十字花科独行菜属多年生草本植物，又称大辣辣、止痢草，世界各地均有分布，在中国主要产于内蒙古、西藏、青海等地海拔1800～4250m的村旁、田边、山坡及盐化草甸;全草人药，有清热燥湿，治菌痢、肠炎作用[1]。本研究选用宽叶独行菜提取物作为受试药物，研究其对胃肠动力障碍大鼠胃排空和肠推进的影响，并观察其对大鼠胃、肠组织匀浆中P物质（SP）和饥饿素（Ghrelin）的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 SPF级SD大鼠，24只，体重180～200g，雌雄各半，购自西安交通大学医学部实验动物中心，许可证号为SCXK（陕）2017-003。

1.1.2 药物与试剂 宽叶独行菜（采自青海省海西州德令哈市郊，由中国科学院西北高原生物研究所吴玉虎研究员鉴定）;2%蓝色葡聚糖-2000溶液（上海源叶生物科技有限公司，批号W29N8E49020）;硫酸阿托品注射液（天津金耀药业有限公司，批号1611231）;RAT SP ELISA KIT、RAT Ghrelin ELISAKIT（武汉基因美生物科技有限公司，批号GR201812-1）。

1.1.3 仪器 752型紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）;S-35K型手持匀浆机（莱普特科学仪器有限公司）：xMark^TMMicroplate Spectro-photometer酶标仪（BIO-RAD美国伯乐）。

1.2 方法

1.2.1 宽叶独行菜提取物的制备 宽叶独行菜全草阴干后粉碎，按料液比1：12（g/mL），浸提温度80℃，浸提时间1h，浸提2次，浓缩、干燥[2]。

1.2.2 造模与给药 大鼠适应性喂养7d后随机分成3组，即空白组、模型组和受试药物组，每组8只，雌雄各半。各组大鼠称重后灌胃给予相应的药物，受试药物组每只大鼠灌胃2ml，宽叶独行菜提取物溶液（0.36g/mL），空白組和模型组每只大鼠灌胃等体积的去离子水，每天1次，连续灌胃6d后禁食不禁水24h，第7天正常给药1h后，模型组和受试药物组腹腔注射硫酸阿托品2mg/kg[3]，空白组腹腔注射等体积的生理盐水。

1.2.3 胃排空和肠推进试验 造模20min后，所有大鼠均灌胃0.4mL 2%蓝色葡聚糖-2000溶液[4]，30min后腹腔注射4mL/kg的10%水合氯醛溶液麻醉大鼠，开腹，结扎贲门、幽门和回盲部，取全胃和小肠。沿胃大弯剪开胃，用10mL去离子水将胃内容物冲洗于巧mL离心管中，3500r/min离心15min，取上清液，用紫外分光光度计于620nm处测吸光度。另取0.4mL 2%蓝色葡聚糖-2000溶液，溶于10mL去离子水，用紫外分光光度计于620nm处测得的吸光度为标准吸光度。将小肠平铺于用生理盐水润湿的试验台上，自然拉直，测量小肠全长和幽门至蓝色前沿距离。胃内色素排空率=（1-胃内残留色素吸光度标准吸光度）×100%，小肠推进率=（幽门括约肌至色素前沿距离/小肠全长）×100%[5]。

1.2.4 SP和 Ghrelin含量测定 取大鼠胃和十二指肠组织，用PBS液洗净后称重，按1：10（g/mL）的比例加入预冷的PBS液，匀浆。将匀浆液转移至离心管，3000r/min离心20min，取上清液-20℃保存备用。取待测组织匀浆液，按照试剂盒说明书操作，检测大鼠胃和十二指肠组织匀浆中SP和Ghrelin的含量。

1.2.5 统计学方法 所有数据均采用SPSS 21.0进行单因素方差分析，处理后的数据均用“x±s”表示，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 宽叶独行菜提取物对大鼠胃排空和肠推进的影响

由表1可见，模型组大鼠与空白组比较，其胃排空率和小肠推进率极显著降低（P<0.01）。受试药物组大鼠胃排空率虽还未恢复至空白组水平，但与模型组相比极显著升高（P<0.01）;受试药物组大鼠小肠推进率与模型组相比极显著升高（P<0.01），与空白组相比差异不显著（P>0.05）。

2.2 宽叶独行菜提取物对大鼠胃肠激素的影响

由表2可见，模型组大鼠胃和十二指肠中SP浓度与空白组比较无显著差异（P>0.05）;模型组大鼠胃中Ghrelin浓度与空白组比较无显著差异（P>0.05），十二指肠中Ghrelin浓度与空白组比较极显著降低（P<0.01）。受试药物组大鼠与模型组比较，胃中SP和Ghrelin浓度显著升高（P<0.05，P<0.01）;十二指肠中SP和Ghrelin浓度均极显著升高（P<0.01）。受试药物组大鼠与空白对照组比较，胃中SP和Ghrelin浓度显著升高（P<0.05，P<0.01）;十二指肠中SP浓度极显著升高（P<0.01），十二指肠中Ghrelin浓度无显著差异（P>0.05）。

3 小结与讨论

近年来，随着生活节奏的加快，人们的饮食和生活规律发生了巨大改变，胃肠动力障碍疾病发病率也显著提高，严重影响了人们的生活质量。硫酸阿托品是M胆碱受体阻断剂，腹腔注射硫酸阿托品是经典的胃肠动力障碍模型造模方法，成功率高[6]。SP是一种重要的胃肠肤，广泛分布于整个胃肠道和肠神经系统，是调节胃肠运动的主要神经递质之一[7，8]。Ghrelin是一种由28个氨基酸组成的多肤，整个胃肠道均有分布[9]。研究表明，Ghrelin参与体内食欲、胃肠运动和胃酸分泌等的调控[10]。本研究采用腹腔注射硫酸阿托品制造胃肠动力障碍模型大鼠，以胃排空率和小肠推进率为指标检测宽叶独行菜提取物对胃肠动力障碍大鼠的影响，并取胃和十二指肠组织，以SP和Ghrelin为指标初步探讨其作用机制。试验结果显示，受试药物组大鼠胃排空率和小肠推进率与模型组比较均显著升高，表明宽叶独行菜提取物能改善硫酸阿托品致胃肠动力障碍大鼠胃肠动力。受试药物组大鼠胃和十二指肠中SP、Ghrelin浓度与模型组比较均显著升高，胃和十二指肠中SP浓度、胃中Ghrelin浓度与空白组比较也显著升高，表明宽叶独行菜提取物可提高胃和十二指肠中SP、Ghrelin浓度。综上，宽叶独行菜提取物能有效改善硫酸阿托品致胃肠动力障碍大鼠的胃肠动力，提高胃和十二指肠中SP和Ghrelin浓度可能是其发挥作用的机制之一，其起效成分和具体机制还有待进一步研究。

参考文献：

[1]中国科学院中国植物志编委会.中国植物志（第33卷）[M].北京：科学出版社，1978.

[2]朱建玲.宽叶独行菜不同极性部位促胃肠动力作用的研究[D].西宁：青海师范大学，2015.

[3]王佳佳，吴震宇，张声生，等.仁术健脾理气颗粒对阿托品致胃肠动力障碍大鼠胃肠运动的影响[J].天津中医药，2917，34（2）：125-127.

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[6]彭成.中医药动物实验方法学（精）[M].北京：人民卫生出版社，2008.

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[9]COWLEY M A，SMITH R G，DIANO S，et al.The distrihutionand mechanism of action of ghrelin in the GNS demonstrates a novelhypothalamic circuit regulating energy homeostasis [J].Neuron，2003，37（4）：649-661.

[10]王宏波，吕杰.Ghrelin与胃癌关系的研究进展[J].重庆医学，2014，43（30）：4110-4113.

收稿日期：2019-07-16

基金项目：青海省基础研究计划项目（2019-ZJ-916）;青海省重点研发与转化项目（2019-SF-124）

作者简介：赵乙桦（1993-），女，江苏盐城人，在读硕士研究生，研究方向为应用植物学，（电话）18862005520（电子信箱）2973976914@qq.com;通信作者，马建滨（1965-），男，青海西宁人，教授，硕士生导师，硕士，主要从事青藏高原特色生物资源应用与开发研究，（电子信箱）mjb_117@163.com;都玉蓉（1968-），女，青海西宁人，教授，硕士生导师，博士，主要从事生理生态学研究，（电子信箱）xndyr@163.com。