王正文，金 鸿，陈 勇，吴冬梅，倪定琴，汪忠荣*

(1. 贵州省黔东南苗族侗族自治州动物疫病预防控制中心，贵州凯里556000；2. 凯里市动物疫病预防控制中心，贵州凯里556000； 3. 凯里市宏大牧业有限责任公司，贵州凯里556000)

黔东南州属于喀斯特山区地带，特殊的地理条件限制了规模化猪场的建设，现有平均年存栏种猪500头以上的规模猪场10个。猪伪狂犬病的防控和净化是种猪场防疫工作的重点内容，为了解我州规模猪场伪狂犬病免疫状况，本试验通过对3个具有代表性的规模猪场进行伪狂犬病免疫抗体监测，为该病的防疫和净化提供参考。

1 材料

1.1 检测血清2017—2019年，每年3月和9月分别对黔东南州3个规模猪场不同猪群进行伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗免疫(疫苗分别购自上海海利生物技术股份有限公司，批号：20160730；武汉科前生物股份有限公司，批号：180521；浙江美保龙生物技术有限公司，批号：281706)，4月和10月按群体5%比例采集血液，分离血清，-20 ℃冰箱冻存待检。3年采集血清A场(大型规模场，种猪≥1 000头)356份，B场(中型规模场，600≤种猪<1 000头)156份，C场(小型规模场，500≤种猪<600头)165份，共计677 份。

1.2 检测试剂猪伪狂犬病病毒gB抗体ELISA检测试剂盒，购自深圳市康百得生物科技有限公司(批号：20170325、20171124、20181026)。

1.3 检测方法在反应孔内先加入样品稀释液50 μL，再分别加入等量的检测样品、阴性和阳性对照，封板，室温反应1 h；洗板，每孔加入酶标结合物100 μL，室温避光反应20 min；甩去孔内液体，加显色液100 μL，室温避光反应15 min；加入终止液50 μL，用酶标仪读取D650 nm值。

1.4 判定标准有效性判定：阴性对照平均D650 nm值-阳性对照平均D650 nm值>0.3为有效，小于0.3则实验无效。计……