李明如，林贵湖，聂振凯，张凯华

中国航天科工集团七三一医院 胸外科，北京 100074

长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一类长度大于200 nt不编码蛋白质的RNA，研究发现其在生物表观遗传调控过程中扮演重要角色[1]。癌症的许多基因突变存在于不编码蛋白质的区域内，lncRNA的异常表达与不同的癌症类型有关[2-4]。BLACAT1是一种lncRNA，最早发现在膀胱癌中高表达，与肿瘤的发生、发展、增殖及转移密切相关[5]。研究表明BLACAT1在非小细胞肺癌组织和细胞中高表达，并调节周期蛋白D1/CDKN2B轴抑制非小细胞肺癌细胞增殖[6]。BLACAT1也可以作为海绵吸附miRNA，从而影响miRNA的表达量及生物学功能。BLACAT1通过靶向miR-361促进ABCB1蛋白的表达，加速了胃癌对奥沙利铂的耐药，为胃癌的耐药研究提供了新的思路[7]。

在此，我们围绕BLACAT1的生物学功能，通过小干扰BLACAT1（si-BLACAT1）降低BLACAT1的表达量，研究对非小细胞肺癌细胞增殖和转移的影响；并且，通过软件预测BLACAT1相互作用的miRNA为miR-374b-5p；结合BLACAT1与miR-374b-5p探讨其对非小细胞肺癌细胞增殖和转移的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

人非小细胞肺癌细胞A549、HCC827、NCIH1299、NCI-H23和正常肺上皮细胞BEAS-2B购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心；DMEM培养基、RPMI1640培养基和胎牛血清（FBS）购自Gibco公司；谷氨酰胺和100 mmol/L丙酮酸钠溶液购自Invitrogen公司；CCK-8细胞活力检测试剂盒购自日本东仁化学公司；Transwell购自 Corning Costar公司；si-BLACAT1、si-NC 和miR-374b-5p mimics（模拟物）购自上海吉玛制药技术有限公司；总RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒和SYBR Green试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）引物、LipofectAMINE 2000购自Invitrogen公司；MMP-2抗体、MMP-9抗体、E钙黏蛋白抗体、N钙黏蛋白抗体和二抗均购自Abcam公司。……