庞晓丽，刘建卫，李虎虎，杨 琳，王青龙

血管新生是以内皮细胞增殖、迁移和成管为特征的复杂过程，常在营养和氧气供应不足时发生，且受多种促血管生成因子如血管内皮细胞生长因子(VEGF)、重组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等调控，VEGF在血管新生中具有重要作用[1-2]。补阳还五汤为传统中药方剂，常被用于治疗脑血管疾病[3]。现代科学研究显示，补阳还五汤对脑缺血损伤的保护作用与促进血管新生有关[4-5]。然而该方剂对血管新生的影响及作用机制尚未完全阐明。因此，本研究以血管段、内皮细胞为研究对象，从体外实验探讨补阳还五汤对血管新生的影响，为补阳还五汤治疗缺血性损伤提供体外实验依据。

1 材料与方法

1.1 试剂 补阳还五汤首载于《医林改错》，组方：黄芪120 g，当归6 g，赤芍4.5 g，川芎3 g，桃仁3 g，红花3 g，地龙3 g。饮片购自北京同仁堂。鼠尾胶、MCDB131培养基、DMEM培养基、细胞计数8(CCK-8)、青霉素链霉素、胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶-EDTA、Trizol、Ⅰ型胶原和羧甲基纤维素等均购自Gibco(美国)公司；RNA反转试剂盒、Real-time PCR试剂盒购自北京天根生化技术有限公司。引物由Sangong生物技术公司(上海)合成。VEGF等抗体购自Santa Cruz生物技术公司(美国)。

1.2 实验动物和细胞 初断乳雄性SD 大鼠，体重约80 g，6周龄雄性SD大鼠，体重约 200 g，均购自中国医学科学院医学实验动物研究所[合格证号 SCXK(京)2014-0004]，经天津中医药大学动物管理和使用委员会批准。人脑微血管内皮细胞(HBMECs)购自美国Sciencell公司。

1.3 补阳还五汤载药血清制备 将雄性6周龄SD大鼠，按人和大鼠用药等效剂量换算(200 g大鼠对应70 kg成人的体表面积系数0.018，故200 g大鼠每天服用生药量为2.565 g)。……