张立坚，池 青，杜琳颖，郭利建，李玉莲，刘香利,3，马 猛,3，赵惠贤,3

(1.西北农林科技大学生命科学学院，陕西杨凌 712100； 2.山东省农业科学院作物研究所，山东济南 250100；3.西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室，陕西杨凌 712100)

小麦(Triticumaestivum)作为世界三大主要粮食作物之一，其产量直接关系着世界粮食安全。1992年Vasil等首次获得转基因小麦[1]，此后许多小麦研究工作者尝试通过转基因技术进行小麦遗传育种改良[2-3]。目前小麦遗传转化主要采用基因枪法和农杆菌介导法[3-4]，基因枪法转化效率不高，通常因为外源基因会出现多位点插入整合，导致外源基因沉默[5]；然而农杆菌介导的遗传转化，转基因植株外源基因插入整合位点和转基因拷贝数较少[2]。外源基因以单拷贝插入整合到受体植物中时，其表达水平较高且遗传稳定性较好；而外源基因以多拷贝插入整合到受体植物时，其表达水平很低甚至会导致基因沉默，而且目标基因的遗传稳定性也较差[6-7]。因此，在小麦转基因研究中，进行T0代转基因再生植株外源基因拷贝数检测，筛选获得单拷贝转基因植株是非常关键的环节，该步骤为后续筛选获得遗传稳定且高效表达的转基因株系奠定了基础[8]。

检测转基因植物外源基因拷贝数最经典的方法是Southern印迹杂交(Southern blot)[9]，该方法准确度较高，但也存在DNA样品用量大、操作步骤繁琐、部分检测步骤还需要放射性同位素等缺陷[10]。针对这些不足，近年来研究者建立了样品用量少、简单、快速、灵敏度高和高通量的实时定量PCR(qRCR)方法来检测转基因植物中外源基因的拷贝数[11]。……