武蕾蕾　于浩臣　陈丽丽　孟令锴　梁启超　张波　展涛　许晓义

【摘 要】 目的：研究锦灯笼醇提取物对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制作用。方法：采用噻唑蓝（MTT）法测定研究组、阴性对照组和阳性对照组的光密度值（OD值），同时利用倒置显微镜观察三组癌细胞形态的改变。结果：肝癌SMMC-7721细胞经锦灯笼醇提取物诱导后发生边缘不整、体积减小等形态学的改变，其折光度和贴壁细胞能力下降;锦灯笼醇提取物对肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用随浓度的增加及时间的延长而逐渐增强，表现为药物剂量依赖性和作用时间依赖性。结论：锦灯笼醇提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖有抑制作用，表明具有体外抗肿瘤的生物学活性。

【关键词】 锦灯笼;醇提取物;MTT;抑制癌细胞增殖

锦灯笼（Calyx seu Fructus Physalis）又名红姑娘、挂金灯，为茄科植物酸浆[Physalis alkekengi L.Var.franchetii （Mast.）Makino]的干燥宿萼或带果实的宿萼，其味酸苦性寒，具有清热解毒、利咽化痰、利尿的功效[1]，为《中华人民共和国药典》收载的品种。近几年许多国内外学者对锦灯笼的抗肿瘤活性成分（酸浆苦素类物质）进行了研究。王伟等发现PB可抑制非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞的增殖并诱导细胞凋亡[2]。曹聪等发现酸浆苦素B（pB）对人非小细胞肺癌A549细胞具有增殖抑制作用[3]。赵珍东等发现酸浆苦素B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制及促凋亡的作用[4]。C.C.Hsu研究发现酸浆苦素B对人黑素瘤细胞（A375和A2058）具有抗增殖的作用[5]。锦灯笼作为一种药食同源的天然植物，在抗肿瘤研究方面具有很高的开发前景，可避免化疗药物对机体正常细胞产生的毒性作用。本研究采用MTT法研究锦灯笼醇提取物对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用。

1 材料与方法

1.1 材料

研究对象：人肝癌SMMC-7721细胞，牡丹江医学院抗肿瘤研究所提供并冻存细胞株。研究药品：锦灯笼醇提物;噻唑蓝（MTT，Amresco公司批号0973）

1.2 方法

MTT法检测锦灯笼醇提取物对肝癌细胞SMMC-7721的体外增殖抑制试验。具体操作步骤如下将人肝癌细胞SMMC-7721细胞株体外培养于RPMI-1640培养基（含10%热灭活小牛血清）中，在37℃、5% CO2、完全饱和湿度条件下的培养箱中培养。取对数生长期的肝癌细胞SMMC-7721，经过胰蛋白酶消化后，再用含有10%小牛血清的培养基配成浓度为1×105个/mL的细胞悬液。用倒置显微镜观察肝癌细胞SMMC-7721未经锦灯笼醇提取物作用时的细胞形态（台盼蓝染色），然后用倍比稀释法调整细胞浓度为5×104/mL。将调整好浓度的细胞悬液接种在96孔培养板中，将接种细胞的96孔板放入37℃、5% CO2培养箱内培养24h。研究组每孔加入含不同浓度（12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL）的锦灯笼醇提取物;阴性对照组加入等体积RPMI-1640细胞培养液;阳性对照组加入5-FU（50μg/mL）。每组设5个平行孔。把加好样的96孔板置于37℃、5% CO2培养箱中分别培养24h、48h、72h。弃去上清液，用培养液洗3次以去除药液。然后每孔加入20μL 5mg/mL MTT溶液，在37℃培养4h后终止培养。小心弃去上清液，每孔加入200μL DMSO（二甲基亚砜），用振荡器低速振荡10min后，在酶标仪490nm处测定每孔的光密度值（OD值）。按下列公式计算锦灯笼醇提取物对肿瘤细胞的增殖抑制率。

肿瘤细胞增殖抑制率（IR）=（1-OD研究组/OD对照组）×100%

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0处理数据，计数资料（n，%）和计量资料（±s）分别行卡方和t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

在12.5～100μg/mL浓度，锦灯笼醇提取物对肝癌SMMC-7721细胞均表现出明显的增殖抑制，且抑制作用随剂量的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结果见表1、表2和图1。

3 讨论

本研究采用MTT法研究锦灯笼醇提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用，结果表明锦灯笼醇提取物对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制作用随浓度的提高及时间的延长而逐渐增强，表现为药物剂量依赖性和作用时间依赖性。用倒置显微镜观察到不同濃度的锦灯笼醇提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖有不同程度的抑制作用，癌细胞经诱导后发生边缘不整、体积减小等形态学改变，其折光度和贴壁细胞能力下降。该研究说明锦灯笼醇提取物具有体外抗肿瘤的生物学活性。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2015版一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：360-361.

[2] 王伟，刘拥征，李岭.酸浆苦素B对人非小细胞肺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响[J].山东大学学报（医学版），2019，57（03）：19-24.

[3] 曹聪.酸浆苦素B对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响及其机制探究[D].杭州：浙江大学，2017.

[4] 赵珍东，方春生，谢小霞，等.酸浆苦味素B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用[J].中成药，2017，39（07）：1502-1506.

[5] Hsu C C，Wu Y C，Farh L，et al.Physalin B from Physalis angμLata triggers the NOXA-related apoptosis pathway of human melanoma A375 cells[J].Food & Chemical Toxicology，2012，50（3-4）：619-624.