张 齐，高 月，刘 显，李熠毅

（广西中医药大学，广西 南宁 530200）

骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal⁃stem cells,BMSCs）是一种具有易于体外分离、扩增，多向分化等潜能的非造血干细胞［1-2］。近年，BMSCs已然成为现代众学者热门研究的课题之一，但BMSCs亦可在肿瘤微环境中出现形态及染色体等异常改变，进而发生恶性转化［3］。因此，如何安全、有效地将BMSCs应用于临床治疗与研究（特别是肿瘤）已成为当务之急。扶芳藤Euonymus fortunei（Turcz.）Hand.-Mazz为卫矛科卫矛属植物，具有抗氧化、提高免疫力及改善血流变等功效［4-5］，笔者欲通过体外模拟小鼠肝癌微环境，并加以扶芳藤提取液进行干预，检测小鼠肝癌微环境中BMSCs Yap蛋白的表达情况，以期观察扶芳藤提取液对小鼠肝癌微环境中BMSCs是否具有保护作用，并探讨肿瘤微环境中BMSCs发生恶性转化的可能机制。

1 实验材料

1.1 细胞 小鼠BMSCs细胞株（广州赛业生物科技有限公司，Catalog Number：MUBMX-01001）；小鼠Hepa1-6肝癌细胞株（中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，Catalog Number：TCM39）。

1.2 试药 参考文献［6］方法制备扶芳藤提取液：取1 kg扶芳藤，加入10倍量水，置于不锈钢锅内蒸煮1 h后过滤，留取过滤液；药渣加入8倍量水，煮开后文火煎30 min，过滤除渣，合并2次过滤液，浓缩至1 000 ml时，冷却；加入95%食用乙醇，混匀至乙醇浓度为80%，室温静置48 h（前24 h内需搅拌3～5次），过滤除渣，滤液于旋转回收器中回收乙醇至无醇味，将无醇液体加热，浓缩为2.0 g/ml的浓度，4℃保存备用，使用时双蒸水稀释即可。

1.3 主要试剂与仪器 胎牛血清（Wisent公司，086-150）；DMEM/F12培 养 基（Hyclone公 司 ，SH30023）；CCK-8试剂盒（上海碧云天公司，C0038）；ECL超敏发光液（Solarbio,PE0010）；研究级显微镜（日本奥林巴斯，IX81）；……